人δ蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)-64位C→T點(diǎn)突變對其轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響的研究.pdf

1、該室將人δ基因啟動(dòng)子區(qū)-64位C突變?yōu)門,恢復(fù)正常的CAAT樣盒,轉(zhuǎn)染人HeLa細(xì)胞,通過檢測報(bào)告基因的表達(dá),間接證實(shí)δ基因低水平表達(dá)與啟動(dòng)子區(qū)CAAT樣盒缺陷有關(guān).該室還通過凝膠遷移率改變實(shí)驗(yàn)(EMSA)研究了人δ珠蛋白基因啟動(dòng)子區(qū)-64位C→T點(diǎn)突變對DNA結(jié)合蛋白的影響,證明δ基因啟動(dòng)子區(qū)CAAT樣盒的缺陷是引起δ基因低水平表達(dá)的重要因素,缺陷的CAAT樣盒通過影響反式因子CP1和GATA-1的結(jié)合影響基因的表達(dá).該工作將人δ基因

2、啟動(dòng)子區(qū)-64位C突變?yōu)門后,克隆于去除強(qiáng)啟動(dòng)子CMV的真基因表達(dá)載體pcDNA3.1-/Myc(-)HisA中,分別將含野生型CAAT樣盒和突變型CAAT樣盒的人δ基因轉(zhuǎn)染鼠紅白細(xì)胞血病(MEL)細(xì)胞,經(jīng)DMSO誘導(dǎo)表達(dá),利用半定量RT-PCR技術(shù),測得δ基因啟動(dòng)子區(qū)-64位C→T點(diǎn)突變后,含突變型CAAT樣盒的人δ基因的轉(zhuǎn)錄水平是含野生型CAAT樣盒的2.190±0.547倍.該研究在mRN水平直接證實(shí)δ基因啟動(dòng)子區(qū)CAAT樣盒的缺