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文檔簡介
1、目的：前期研究發(fā)現(xiàn)人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9(GLUT9)基因啟動(dòng)子區(qū)SNP rs13124007位點(diǎn)G/C與中國漢族男性的痛風(fēng)易感性顯著相關(guān)。本研究擬進(jìn)一步開展功能研究探討該SNP是否通過影響GLUT9基因啟動(dòng)子的活性，進(jìn)而引起痛風(fēng)發(fā)生。
方法：PCR擴(kuò)增包含GLUT9基因啟動(dòng)子區(qū)SNP rs13124007位點(diǎn)在內(nèi)的DNA片段，構(gòu)建野生型（pGL3-basic-GLUT9/G）和突變型（pGL3-basic-GLUT9/C）質(zhì)粒，
2、將質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞使其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)研究 SNP rs13124007 G/C對GLUT9啟動(dòng)子區(qū)激活能力的影響，通過凝膠遷移率（EMSA）實(shí)驗(yàn)觀察兩種等位基因型探針轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合情況。
結(jié)果：重組質(zhì)粒經(jīng)測序鑒定，證明目的片段已成功插入，且序列方向正確，重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)顯示pGL3-basic-GLUT9/C較pGL3-basic-GLUT9/G對啟動(dòng)子激活能力下降(P?0.0
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