三種鱗翅目昆蟲幾丁質降解酶基因的克隆及分子特性研究.pdf

1、C la ssifie dIn d e x :U. D .C :D isse rtat io nfo rth eM a ste rD e g re einA g ric u ltu reM O L E C U L A RC L O N G IN GA N DC H A R A C T E R IZ A T IO NO FC H IT IND E G R A D IN GE N Z Y M E SF R O MT H R E EL E P

2、 ID O P T E R A NIN S C E T SC a n d id a te : H e 月 Yt l fl ianS u P e rv is o r : A sso e ia teP ro f.F a nD o n gA e a d e m ieD e g re eA P P Iie dfo r : M a ste ro f A g ricu ltu reS P eeia lity : A g rieu l turalE

3、n tom o lo g yan dP estC on tro lD a teo fo r a lE x a m in a tio n : Ju n e ， 2 0 0 9U n i v ersity : N orth eastA g ricu l tu ralU n l v ersi ty東北農 業(yè)大 學農 學碩 士 學位 論 文2. 3 。 D N A 序 列 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . .

4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， 二 ， . . . . . . ……192.3.1 利用 Blast 軟件進行序 列相似 性檢 索 . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……，

5、， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192.3. 2 分 子 質 量 、堿 基組 成 、堿 基 分布 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、 . . . . . . ……192. 3. 3 全 長 cD N A 可 讀框 架 分 析. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 3. 4 對 O 盯 進行

7、 限制性酶切 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 3. 5 核 酸 序 列對 齊 分析 的功 能預測 . . …， . . . . . . . . . . . . . .

8、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 4 蛋 白質 基 本 性 質 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . .

9、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . ……192. 4 .1 信 號膚 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

10、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202.5 蛋 白質 功 能 預 測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

11、. . . . . ……， . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……加2. 5.1 蛋 白質 序 列 同源 性 分析 及 蛋 白質 功 能預 測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202. 5. 2 結

12、構位 點 、結構功 能域 數據庫 的蛋 白質 功 能預測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . ……202 . 6 蛋 白質 結 構 預 測 . …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

13、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202. 6.1 蛋 白質 二 級 結構 預 測 . . . ……， . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

14、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202.6. 2 蛋 白質 三 級 結構 預 測 . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . .

15、 . . . . . . . ……202. 7 不 同生長 發(fā)育 時期 p樸 乙酞葡糖胺 糖昔 酶基 因表 達 水平研 究 . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202. 7 .1 總 R N A 的提 取 . . . . . . . . . . . ……， 二 ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202.7. 2cD N A 第 一鏈 的合成 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202. 8 p一 乙酞葡糖 胺 糖 昔酶基 因在大腸 桿 菌 中的表 達研 究. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202. 8.l p一 N 一 乙酞 葡 糖

18、胺 糖 昔 酶 基 因 cD N A 序 列 O RF 的 P C R 反應 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212. 8. 2P C R 產 物 酶切 反應 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212 . 8. 3E.c口 ll ’ 質 粒 D N A 提 取 和 酶 切 . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

20、. . . . . . . . . . . . . . ……212.8. 4 大腸 桿 菌表 達載體構建 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212

21、.8. 5 p一 乙酸 葡 糖 胺 糖 昔 酶 基 因在 大腸 桿 菌 中誘 導 表 達 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……212.8. 6SD S一 PA G E 電泳 ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . .

22、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……223 結果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

23、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……243.1 幾 丁質 降解 酶 R N A 的提取 . . . . . . . . . . . . . . . . .

24、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . ……243.1.1R N A 完 整性 的檢測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

25、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……243.1. 2 純度 及 產 量檢 測 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

26、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……243. 2R T-P C R 得 到幾 丁質 降解 酶 的基 因特 異 性片段及 序 列 分析 . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……243. 2.1pN 一 乙酞 葡糖胺 糖昔

27、酶 的基 因特 異 性片段 及 序 列 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， …243. 2. 2 幾 丁質 酶 的基 因特異性 片段及序 列 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

28、. . ……253. 2.3 幾 丁質 脫 乙酞基 酶 的基 因特 異 性 片段及 序 列 分 析 . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……253. 3 基 因 cD N A 序 列 的 3’ .R A CE 結 果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

29、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……263 . 3.l p一 N 一 乙酸 葡 糖胺 糖 昔 酶 基 因 cD NA 序 列 的 3’ 一 RA C E 結 果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. ……263. 3. 2 幾 丁質 酶基 因 c

30、D N A 序 列 的 3’ .R A C E 結 果 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……263. 3. 3 幾 丁質 脫 乙酞基 酶基 因 。 D N A 序 列 的 3 ’ .R A C E 結 果 . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . .

31、 . . . . . . ……273. 4 幾 丁質 降解 酶 基 因 cD N A 序 列 的 5’ ~R A C E 結果 ……， . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……273. 4.l p一 N 一 乙酞 葡糖胺 糖昔酶 cD NA 序 列 的 5’ 一 RA C E 結果 . . . . . . . . .