姜黃揮發(fā)油對皮膚鱗癌A431細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：研究姜黃揮發(fā)油對人皮膚鱗癌（CSCC）A431（以下簡稱A431）細胞增殖與凋亡的影響，并探究其凋亡機制。
　　方法:應(yīng)用不同濃度的姜黃揮發(fā)油分別作用于皮膚鱗癌A431細胞24h、36h、48h，用Cell Counting Kit-8（CCK-8）檢測增殖抑制率；倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化；吖啶橙（AO）/溴化乙錠（EB）雙染色熒光顯微鏡觀察A431細胞凋亡情況；流式細胞儀檢測細胞凋亡；Western blot法檢測半胱

2、氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9)表達量。
　　結(jié)果：本實驗通過CCK-8檢測不同濃度（0、5、10、20、40、80μmol/L）姜黃揮發(fā)油作用人皮膚鱗癌A431細胞24h、36h、48h后，表現(xiàn)出不同大小的抑制作用，藥物濃度從低濃度至高濃度，抑制率呈增高趨勢，且其作用方式呈現(xiàn)劑量依賴性.作用24h后，當藥物濃度達到10 mg/L,倒置顯微鏡下觀察到當加入藥物后，表現(xiàn)為

3、細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞增殖速度明顯變慢，AO/EB染色后可見部分早期凋亡細胞，核染色質(zhì)著黃綠色或黃色；當藥物濃度達到20 mg/L，細胞核固縮，部分腫瘤細胞膜開始破裂，可見部分細胞內(nèi)容物釋放，AO/EB染色后可見部分黃色熒光的早期凋亡細胞和呈橘紅色熒光的晚期凋亡細胞；當藥物濃度達到40 mg/L，腫瘤細胞明顯減少，部分細胞裂解成細胞碎片，并有大量漂浮細胞，AO/EB染色后可見大量細胞核染色質(zhì)呈橘紅色，并可見橘紅色壞死細胞及碎片；流式細胞儀

4、檢測表明姜黃揮發(fā)油對皮膚鱗癌A431細胞具有促進凋亡作用，且隨著藥物濃度的增加，呈藥物濃度-凋亡率正相關(guān)性；Western blot法檢測結(jié)果半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9)表達量隨著藥物濃度增加而增加，呈一定范圍范圍內(nèi)濃度依賴性，且同一藥物濃度作用下，Caspase-3蛋白表達量均多于Caspase-9。
　　結(jié)論：姜黃揮發(fā)油對皮膚鱗癌A431細胞具有增殖抑制及促