中藥復(fù)方制劑對皮膚鱗癌A431細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的:研究由麥冬、半夏、白頭翁、蒲公英、川芎和白花蛇舌草六味中藥組成的中藥復(fù)方制劑對體外培養(yǎng)的人皮膚鱗癌A431細胞的增殖與凋亡的影響，并探討其作用機制，為開發(fā)皮膚鱗癌藥物治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　(1) MTT比色法測定中藥復(fù)方制劑對A431細胞株增殖活性的影響;
　　(2)光鏡觀察細胞形態(tài)學的改變;
　　(3)光化學法測定細胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放;
　　(4) Hochest33258細

2、胞核熒光染色法檢測中藥復(fù)方制劑對A431細胞凋亡的影響;
　　(5)比色法測定Caspase-3和Caspase-9活性;
　　(6)酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa)檢測細胞色素C含量;
　　(7)免疫細胞化學法測定Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表達;
　　(8)流式細胞儀檢測中藥復(fù)方制劑作用于A431細胞株后細胞周期的分布及凋亡率的變化。
　　結(jié)果:
　　(1) MTT法顯示，隨著中藥復(fù)方制劑作用時間

3、延長及劑量增加，其對A431細胞增殖的抑制作用增強，有明顯的時間和劑量依賴性，與對照組比較差異有顯著性(P＜0.01);
　　(2)光鏡顯示中藥復(fù)方制劑能夠引起細胞形態(tài)的改變。
　　(3)LDH結(jié)果顯示:高、中、低劑量組中藥復(fù)方制劑LDH值較陰性對照組增高(P＜0.05;P＜0.01);
　　(4)Hochest33258染色結(jié)果顯示，不同濃度劑量組作用細胞48h后，細胞核均出現(xiàn)不同程度藍色熒光，可見核固縮、凋亡小體等

4、典型的凋亡形態(tài)學特征;
　　(5)Caspase活力檢測結(jié)果顯示:Caspase-3、Caspase-9活力表達增加，與陰性對照組比較有顯著性差異(P＜0.05;P＜0.01);
　　(6)細胞色素C檢測結(jié)果顯示:不同濃度劑量組細胞色素C含量較陰性對照組增高(P＜0.01);
　　(7)免疫細胞化學法結(jié)果顯示:與陰性對照組比較，中藥復(fù)方制劑組Bax表達增加，Bcl-2表達減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；

5、>　　(8)流式細胞儀檢測:中藥復(fù)方高、中、低劑量組細胞凋亡率較陰性對照組增加，其中高、中劑量組與陰性對照組比較有顯著差異(P＜0.05);中藥復(fù)方制劑高、中、低劑量組G0/G1期細胞較陰性對照組增多，S期、G2/M期細胞減少，其中中藥復(fù)方制劑高劑量組G0/G1期較陰性對照組增高，S期較陰性對照組降低，具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)不同濃度的中藥復(fù)方制劑有抑制皮膚鱗癌A431細胞增殖的作用，且呈一定