芪藍(lán)制劑對體外培養(yǎng)口腔癌前細(xì)胞增殖、凋亡影響研究.pdf

1、目的：本研究應(yīng)用不同濃度的芪藍(lán)制劑作用于人口腔黏膜正常上皮細(xì)胞(Human Oral Keratinocytes HOK)、口腔黏膜異常增生細(xì)胞(Dysplastic Oral Keratinocyte DOK)、人舌鱗癌細(xì)胞（Tca8113），觀察芪藍(lán)制劑對不同癌變程度細(xì)胞是否有選擇性抑制作用，對DOK細(xì)胞增值和凋亡的影響機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)HOK、DOK、Tca8113.形成不同癌變程

2、度的三種細(xì)胞系。
　　2.采用CCK-8法檢測芪藍(lán)制劑對HOK、DOK、Tca8113增殖的抑制作用。
　　3.采用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度芪藍(lán)制劑作用后 DOK細(xì)胞周期和凋亡的變化。
　　4.采用蛋白質(zhì)印跡法（Western blot WB）檢測DOK細(xì)胞內(nèi)b細(xì)胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2 Bcl-2)蛋白、Bcl-2相關(guān) X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein Bax)和細(xì)胞

3、周期蛋白D1(Cylin D1)蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1．HOK角蛋白染色陽性，HOK、DOK、Tca8113具有不同的生長特性。
　　2. CCK-8法檢測表明芪藍(lán)制劑對HOK、DOK、Tca8113細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)，并呈劑量效應(yīng)關(guān)系
　　3.流式細(xì)胞儀檢測顯示DOK細(xì)胞用藥組G0/G1期細(xì)胞高于對照組，凋亡率隨芪藍(lán)制劑濃度的升高而增加。
　　4. WB結(jié)果顯示一定濃度的芪藍(lán)制劑作用

4、于 DOK24h后,隨著濃度的升高Cyclin D1及Bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸降低，Bax蛋白的表達(dá)與 Bax/Bcl-2比值逐漸升高。
　　結(jié)論：
　　1.成功體外培養(yǎng)HOK、DOK、Tca8113。三者具有不同的生長特性，形成不同癌變程度的三種細(xì)胞系。
　　2.芪藍(lán)制劑對Tca8113、DOK的增殖具有顯著的抑制作用。
　　3.芪藍(lán)制劑具有低毒性和選擇性抑制作用，抑制作用隨癌變程度的增加而增強(qiáng)。
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