阿托伐他汀對子宮肌瘤細(xì)胞的作用及其相關(guān)機制研究.pdf

1、目的：
　　阿托伐他汀為他汀類藥物中最常見的一種。研究發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀能有效抑制部分惡性腫瘤細(xì)胞的增殖。但是，阿托伐他汀對子宮肌瘤是否有抑制作用目前尚不清楚。本實驗采用體外原代人子宮平滑肌瘤細(xì)胞以及永生化人子宮平滑肌瘤細(xì)胞培養(yǎng)，研究阿托伐他汀對子宮平滑肌瘤細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響及其相關(guān)機制，為有效治療子宮肌瘤提供新思路。
　　方法：
　　（1）采用細(xì)胞培養(yǎng)永生化子宮平滑肌瘤細(xì)胞以及通過膠原酶消化法進(jìn)行原代培養(yǎng)子宮平滑

2、肌瘤細(xì)胞，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色SP法分別對子宮平滑肌瘤細(xì)胞進(jìn)行鑒定。（2）通過CCK8法檢測兩種細(xì)胞增殖活性及抑制率：不同濃度（0μM、1μM、5μM、10μM、20μM、40μM）阿托伐他汀作用原代及永生化子宮平滑肌瘤細(xì)胞不同時間（24h，48h，72h）。（3）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測兩種細(xì)胞凋亡率：不同濃度（0μM、1μM、5μM、10μM、20μM、40μM）阿托伐他汀分別作用永生化子宮平滑肌瘤細(xì)胞48h和72h；運用Annexin V

3、-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡從而選取藥物最佳作用時間。（4）通過phospho-MAPK抗體芯片檢測經(jīng)阿托伐他汀作用后永生化子宮平滑肌瘤細(xì)胞內(nèi)MAPK相關(guān)信號通路的蛋白變化情況。（5）分別選取細(xì)胞增殖抑制和凋亡促進(jìn)最佳時間提取蛋白，通過蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）分析阿托伐他汀對子宮平滑肌瘤細(xì)胞增殖（PCNA）和凋亡（Caspase3、Bcl-2、Bax）相關(guān)蛋白和ERK1/2蛋白的影響及其機制。
　　

4、結(jié)果：
　　（1）在不同濃度（0μM、1μM、5μM、10μM、20μM、40μM）阿托伐他汀作用后兩種子宮平滑肌瘤細(xì)胞增殖均出現(xiàn)明顯抑制（差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05），且隨著阿托伐他汀濃度增加，兩種細(xì)胞增殖抑制率隨之相應(yīng)增高，P＜0.05；隨阿托伐他汀作用時間（24h，48h，72h）增加兩種細(xì)胞增殖抑制率也增加，P＜0.05。永生化子宮平滑肌瘤細(xì)胞在不同濃度阿托伐他汀作用48h細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到高峰，原代子宮平滑肌瘤細(xì)胞則

5、在阿托伐他汀作用72h細(xì)胞增殖抑制達(dá)到高峰。（2）隨著阿托伐他汀濃度以及作用時間的增加，細(xì)胞凋亡率逐漸升高，P＜0.05。永生化子宮平滑肌瘤細(xì)胞在阿托伐他汀作用48h凋亡達(dá)到高峰，原代子宮肌瘤細(xì)胞在阿托伐他汀作用72h凋亡率變化不明顯。（3）在經(jīng)過phospho-MAPK抗體芯片檢測細(xì)胞后，觀察到其中p-ERK2、p-JNK pan、p-HSP27蛋白位點有下調(diào)趨勢，p-ERK2、p-JNK pan下調(diào)顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0