脂肪乳對離體血管及內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：脂肪乳作為一種常見的腸外營養(yǎng)制劑，越來越多非營養(yǎng)方面的作用被人們所發(fā)現(xiàn)，如作為部分局麻藥中毒的搶救用藥。有研究報(bào)道靜脈輸注脂肪乳可以升高健康人的血壓，但其機(jī)制尚不清楚，我研究所前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)脂肪乳能夠逆轉(zhuǎn)內(nèi)皮性舒張藥物乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)。為進(jìn)一步研究脂肪乳的逆轉(zhuǎn)血管舒張的作用機(jī)制，我們在離體血管組織和細(xì)胞水平研究了脂肪乳對其功能的影響。
　　方法：⑴制備大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)，采用血管張力測定系統(tǒng)，觀察記錄①脂肪乳

2、（Lipid emulsion，LE）對苯丙腎上腺素（phenylephrine，Phe）誘發(fā)的血管收縮反應(yīng)的影響，②脂肪乳對乙酰膽堿（acetylcholine,Ach）誘發(fā)的血管舒張反應(yīng)的影響。⑵細(xì)胞培養(yǎng)，購買原代人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞株進(jìn)行傳代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到90％融合時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將細(xì)胞團(tuán)吹打成細(xì)胞懸液，然后種植在纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)的圓玻片上，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱需保持37°C恒溫和通以含5% CO2和95%氧氣的混合氣

3、體。培養(yǎng)超過24小時(shí)后進(jìn)行鈣離子熒光標(biāo)記，用鈣成像檢測系統(tǒng)檢測并記錄預(yù)孵育LE對ATP誘發(fā)的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化的影響。
　　結(jié)果：①在大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)上， LE對血管收縮和舒張反應(yīng)的影響。0.4%脂肪乳預(yù)孵育5分鐘不影響Phe誘發(fā)的血管收縮濃度-反應(yīng)曲線（ P>0.05）。Phe（0.001-30μM）誘發(fā)離體血管環(huán)收縮反應(yīng)之后，給予Ach（0.0001-3μM）,觀察并記錄 Ach（0.0001-3μM）誘發(fā)

4、的舒張反應(yīng)。0.4%LE預(yù)孵育5分鐘之后，明顯抑制 Ach誘發(fā)的血管舒張反應(yīng)（P<0.05）。②體外培養(yǎng)24h-48h的血管內(nèi)皮細(xì)胞，3μM Ach可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i增加，0.4%LE浴槽灌流孵育5min后 Ach誘發(fā)的[Ca2+]i升高的幅度明顯降低（P<0.05）。③10μM ATP也可以引起內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i增加，0.4%LE浴槽灌流孵育5min后明顯抑制 ATP（10μM）介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i升高（P

5、<0.001）。④不同濃度的脂肪乳（0.2%，0.4%，0.8%和2.5%）浴槽灌流孵育5min后對內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i變化的影響不存在濃度-劑量的依賴性。以0.4%脂肪乳的影響最為明顯（ P<0.001）。0.4%脂肪乳孵育不同時(shí)間2min，5min，15min均可以抑制ATP介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i升高。⑤以0.1mM的 EGTA螯合掉細(xì)胞外鈣離子，0.4%LE浴槽孵育5min后，依舊可以明顯抑制 ATP（10μM）介導(dǎo)的

6、內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i升高（P<0.001）。⑥0.4%LE預(yù)孵育5min明顯抑制5μM環(huán)匹克尼酸（CPA）誘導(dǎo)的[Ca2+]i的升高（P<0.001）。⑦布比卡因（300μM）可以使得血管內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i明顯升高。⑧脂肪乳孵育一小時(shí)后可以顯著抑制10μM ATP刺激兩小時(shí)后引起的內(nèi)皮細(xì)胞NO釋放（P<0.05）。
　　結(jié)論：大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)，LE短時(shí)間孵育后對Ach誘導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)EC50值明顯變大。傳代的人主動(dòng)脈