黃芩苷—PVP共沉淀物膠囊的制備及犬體內(nèi)藥動學(xué)研究.pdf

1、黃芩苷(Baicalin)是從唇形科植物黃芩的干燥根中提取的單一有效成分，能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖并對放化療所致的肝損傷有防護(hù)作用。但由于其難溶性而導(dǎo)致制劑溶出度低、生物利用度差(僅2.2％±0.2％)，限制了黃芩苷達(dá)到抗腫瘤所需的藥物濃度，臨床上現(xiàn)用于治療急性黃疸型、急性無黃疸型及慢性肝炎，目前市售口服制劑僅有常規(guī)的片劑和膠囊。固體分散體技術(shù)是一種被廣泛用于提高難溶性藥物溶出速率的新技術(shù)，能使難溶性藥物以微晶、無定形、分子狀態(tài)分散在

2、載體中而呈固體分散體，分別被稱著簡單低共熔混合物、共沉淀物(又稱玻璃態(tài)固熔體)、固態(tài)溶液。藥物在載體中的分散狀態(tài)直接影響藥物的溶出速率，其中分子分散狀態(tài)最快，其次是無定形態(tài)，微晶態(tài)最慢。不同的載體則直接影響藥物在其中的分散形態(tài)。
　　因此，本文利用固體分散體技術(shù)，以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為載體，用溶劑法將黃芩苷制備成芩苷-PVP共沉淀物，裝入胃溶膠囊作為口服制劑，并對其制備工藝、溶出度、物相、處方工藝、穩(wěn)定性和藥代動力學(xué)進(jìn)行了研

3、究。擬解決黃芩苷在臨床應(yīng)用中存在的不足，提高藥物服用后血藥濃度，擴(kuò)大其在臨床上抗腫瘤方面的應(yīng)用。
　　本文完成的主要工作和結(jié)論如下：
　　1.建立紫外光譜法測定黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊的藥物含量及四種溶出介質(zhì)中的溶出度，為制劑處方篩選和質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。采用島津UV-3150紫外可見分光光度計，在278nm單波長處，測定黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊的藥物含量及在0.1mol·L-1HCl溶液、蒸餾水、pH4.5溶液、pH6

4、.8溶液中的溶出度。結(jié)果顯示：含量測定時，黃芩苷濃度在3.473～9.261μ g·m L-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9998)，平均加樣回收率為98.85％。溶出度測定時，在0.1 mol·L-1HCl溶液中，黃芩苷濃度在1.158～15.049μ g·m L-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9998)，平均加樣回收率為99.47％；在蒸餾水、pH4.5溶液、pH6.8溶液中，黃芩苷濃度在1.158～12.734μ g·m L-

5、1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率分別為99.63％、99.82％、98.75％。該測定方法簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。
　　2.改進(jìn)黃芩苷-PVP共沉淀物的制備工藝，降低生產(chǎn)成本，進(jìn)一步提高難溶性藥物高黃芩苷的溶出度及藥輔比。運(yùn)用改進(jìn)工藝的共沉淀法制備藥輔比分別為1:2、1:3、1:4的黃芩苷-PVP共沉淀物并制成胃溶膠囊。采用紫外光譜法測定其藥物含量及在0.1mol·

6、L-1HCl溶液、蒸餾水、pH4.5溶液、pH6.8溶液中的溶出度并與原料藥膠囊對比，采用X-射線粉末衍射法考察共沉淀物中黃芩苷晶體特征。結(jié)果顯示：藥輔比分別為1:2、1:3、1:4的黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊在0.1mol·L-1HCl溶液中的溶出度為原料藥膠囊的4.8倍、21.5倍、30.4倍；在蒸餾水中為原料藥膠囊的1.7倍、3.3倍、3.4倍；在pH4.5溶液中為原料藥膠囊的2.06倍、2.02倍、2.09倍，在pH6.8溶液中

7、的溶出度與原料藥膠囊相近。X-射線粉末衍射表明藥輔比分別為1：2、1:3、1:4的共沉淀物中黃芩苷的晶體峰均消失。通過改進(jìn)工藝制備的黃芩苷-PVP共沉淀物可有效地降低生產(chǎn)成本，可顯著提高黃芩苷的溶出度及藥輔比，提高效果遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)報道的結(jié)果。
　　3.確定了制備黃芩苷-PVP共沉淀物的處方及工藝。通過前期對各種藥輔比的黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊的制備工藝、處方配比、溶出度考察及X-衍射考察，作者最終確定黃芩苷-PVP共沉淀物的處方為

8、藥輔比1:3，并試圖大量制備。作者通過對黃芩苷-PVP共沉淀物的制備工藝條件進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，現(xiàn)單次可制備黃芩苷-PVP共沉淀物28.00g，溶出度試驗(yàn)表明，大批量生產(chǎn)的藥輔比為1:3的黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊溶出度無改變，可達(dá)到中國藥典2010年版附錄對膠囊溶出度所要求：在45min時間里，溶出度值大于70％。
　　聯(lián)合多方法對黃芩苷-PVP共沉淀物進(jìn)行了物相鑒定。采用高精度原子力顯微鏡(AFM)、溶出度測定、紅外光譜法(IR)

9、、X-射線粉末衍射法(XRD)、差示掃描量熱法(DSC)等方法進(jìn)行考察。AFM結(jié)果顯示：黃芩苷以分子狀態(tài)存在于PVP高分子中，且與PVP形成了分子間氫鍵；溶出度結(jié)果顯示：在以蒸餾水為溶出介質(zhì)中，共沉淀物膠囊的溶出度為原料藥膠囊的3.6倍，表明藥物高度分散在輔料中；XRD結(jié)果顯示：共沉淀物中黃芩苷的晶體峰消失，表明黃芩苷以無定形或分子態(tài)存在于PVP高分子中；IR結(jié)果顯示：共沉淀物在3550 cm-1～3200cm1間出現(xiàn)兩個寬的吸收峰，說

10、明有游離及締合的羥基存在，表明有分子間氫鍵的形成；DSC結(jié)果顯示：共沉淀物中黃芩苷的熔點(diǎn)從223℃變?yōu)?19℃，說明黃芩苷以高度分散狀態(tài)存在于PVP中。溶出度實(shí)驗(yàn)、DSC、XRD和AFM分析證實(shí)黃芩苷以無定形或分子狀態(tài)的高度分散載體材料中，而藥物分子與載體之間的氫鍵形成有利于維持這種高度分散的穩(wěn)定性。同時表明高精度的原子力顯微鏡能更直觀地從分子水平上分析藥物與輔料的空間構(gòu)象及其相互作用，克服了傳統(tǒng)方法的缺陷，為開發(fā)新型黃芩苷-PVP固體

11、分散體制劑打下基礎(chǔ)。
　　4.考察了黃芩苷-PVP共沉淀物的穩(wěn)定性。影響因素考察結(jié)果顯示，高溫(60℃或40℃)、高濕(25℃，RH90％±5％或25℃，R H75％±5％)、強(qiáng)光對黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊含量、溶出度、性狀、重量影響均較大，其中高濕影響最大。加速實(shí)驗(yàn)表明，黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊按市售包裝(置雙鋁箔密封包裝內(nèi))，在40℃±2℃，RH75％±5％條件下放置6個月，黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊的含量及溶出度降低。長

12、期試驗(yàn)表明，黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊按市售包裝(置雙鋁箔密封包裝內(nèi))，在25℃±2℃，R H60％±5％條件下放置1年，黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊的含量、溶出度、性狀、重量均無明顯變化，提示本品有效期可暫定為1年。
　　5.建立了高效液相色譜法測定beagle犬血漿中黃芩苷的含量。色譜條件為，色譜柱：Hypersil ODS250mm×4.6mm，5μm，保護(hù)柱；Hypersil ODS4.0mm×3.0ram，5μ m，流動相

13、：甲醇：0.1％H3PO445:55(v/v)，內(nèi)標(biāo)：大豆苷元甲醇液，流速：0.8 mL/min，UV檢測波長：278nm，進(jìn)樣量：50μL，柱溫：30℃。采用液液萃取及固相萃取法處理血漿樣品，并通過氮?dú)獯蹈蓾饪s，能夠提取并初步分離ng級的黃芩苷樣品。結(jié)果顯示血漿中雜質(zhì)不干擾主藥和內(nèi)標(biāo)的測定，這表明該方法專屬性強(qiáng)，3.648-364.8 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R=0.998(n=6)，萃取回收率在80％-90％之間，精密度R

14、SD均小于10％，黃芩苷血漿樣品在室溫條件下，凍融條件下，長期條件下穩(wěn)定性均良好。符合生物樣本的分析要求。表明該法準(zhǔn)確、可靠，可用于beagle犬血漿中黃芩苷的定量檢測。
　　6.考察了黃芩苷-PVP共沉淀物在beagle犬的體內(nèi)藥代動力學(xué)。以黃芩苷原料藥膠囊為參照制劑，采用自身對照交叉給藥法，對6只beagle犬進(jìn)行體內(nèi)藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)。藥-時曲線及藥動學(xué)參數(shù)顯示：與黃芩苷原料藥膠囊相比，黃芩苷-PVP共沉淀物膠囊使藥物在犬胃及結(jié)