PVP包衣去甲斑蝥素——?dú)ぞ厶羌{米粒的制備及動(dòng)物體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、目的：本文研制了一種新穎的劑型PVP包衣去甲斑蝥素-殼聚糖納米粒(polyvinylpyrrolidone-coatednorcantharidinchitosannanoparticles,PVP-NCTD-NPs),以提高去甲斑蝥素(NCTD)的生物利用度以及降低其腎毒性;同時(shí)建立高效液相色譜(HPLC)法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測(cè)定生物樣品中NCTD濃度，旨在研究PVP-NCTD-NPs在體內(nèi)的吸收、分布、

2、代謝和排泄過程，為其進(jìn)一步研究與開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：(1)等溫吸附法考察載體殼聚糖(CS)濃度、NCTD濃度以及pH等因素對(duì)包衣納米粒載藥特性的影響，推斷其吸附規(guī)律;原子力顯微鏡(AFM)驗(yàn)證納米粒形態(tài)學(xué)特征。(2)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化PVP-NCTD-NPs的制備;動(dòng)態(tài)激光散射法測(cè)定平均粒徑與粒度分布;紅外光譜(FT-IR)、X-射線衍射(XRD)、掃描電鏡(SEM)對(duì)其進(jìn)行表征;并考察納米粒在體外不同pH介質(zhì)中的釋藥性質(zhì)

3、。(3)大鼠血液中NCTD含量LC-MS/MS測(cè)定方法的建立及藥代動(dòng)力學(xué)研究:以高氯酸和甲醇雙重沉淀生物樣品中蛋白質(zhì)，多重反應(yīng)離子（MRM）模式測(cè)定大鼠尾靜脈注射和口服PVP-NCTD-NPs與原藥NCTD后血藥濃度，3P97軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。(4)小鼠血液及各組織中NCTD含量LC-MS/MS測(cè)定方法的建立及組織分布研究:以NCTD為參比制劑，考察小鼠口服給予PVP-NCTD-NPs后藥物在各組織臟器中的分布，以靶向效率（Te）、相

4、對(duì)靶向效率（RTe）和靶向指數(shù)(TI)為評(píng)價(jià)參數(shù)，分析其對(duì)各組織的靶向性。(5)大鼠糞便及尿液中NCTD含量LC-MS/MS測(cè)定方法的建立及體內(nèi)代謝研究:大鼠口服給予PVP-NCTD-NPs后，于不同時(shí)間段以MRM模式檢測(cè)尿樣及糞樣中NCTD含量，計(jì)算藥物累積排泄率;并根據(jù)代謝產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量及質(zhì)譜行為，推斷其結(jié)構(gòu)。(6)大鼠肝微粒體中NCTD含量LC-MS/MS測(cè)定方法的建立及體外酶促動(dòng)力學(xué)研究:鈣離子沉淀法制備大鼠肝微粒體，Low

5、ry法測(cè)定肝微粒體蛋白濃度;考察孵育時(shí)間、酶濃度和底物濃度對(duì)藥物代謝速率的影響，并根據(jù)Lineweave-Brurk雙倒數(shù)曲線，計(jì)算酶促動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果：(1)PVP-NCTD-NPs的吸附更加符合Freundlich經(jīng)驗(yàn)公式，y=0.698x+4.012，相關(guān)系數(shù)r=0.998，證實(shí)藥物主要以包裹的形式存在于納米粒骨架中;AFM二維圖顯示:2.5％PVP組的納米粒形態(tài)均一，包裹現(xiàn)象明顯，而過量的PVP會(huì)降低藥物的包封率

6、。(2)采用最佳處方制備的PVP-NCTD-NPs平均粒徑為(140.03±6.23)nm，包封率為(56.33±1.41)％，載藥量為(8.38±0.56)％;由SEM圖和AFM三維圖可見納米粒呈球形，顆粒飽滿。相比于原料藥組，PVP-NCTD-NPs在0.1mol·L-1HC1和PBS(pH=5.7)兩種介質(zhì)中釋放更加緩慢，累積釋放率達(dá)85％。(3)大鼠血液中NCTD含量LC-MS/MS測(cè)定方法的回收率均大于95％，日內(nèi)、日間精密度

7、均小于10％，證實(shí)該方法符合生物樣品分析的要求。經(jīng)3P97軟件擬合，兩種制劑的藥代動(dòng)力學(xué)過程均符合二室模型。與NCTD相比，PVP-NCTD-NPs的AUC顯著增大(P＜0.05），CL顯著降低(P＜0.05），靜脈注射組的相對(duì)生物利用度為325.5％，口服組的相對(duì)生物利用度為173.3％。(4)小鼠組織分布研究結(jié)果表明，PVP-NCTD-NPs在體內(nèi)藥物濃度分布趨勢(shì)為膽囊＞腎臟＞肝臟＞其他臟器，而NCTD為肺臟＞心臟＞腎臟＞其他臟器;

8、納米粒組藥物以原藥自尿中排出的量是原料藥組的1.37倍，自膽汁和（或）糞便排出的是32.21倍.(5)大鼠排泄研究表明，口服PVP-NCTD-NPs24h后，在尿液及糞便中NCTD累積排泄率分別為17.80±3.32％和4.51±0.89％，大鼠尿樣中共檢測(cè)到八種代謝產(chǎn)物，而糞便中只有兩種。(6)大鼠肝微粒體中代謝酶動(dòng)力學(xué)顯示，原料藥組的肝內(nèi)清除率(CLint)要大于PVP-NCTD-NPs組(P＜0.05），而兩者最大反應(yīng)速率（Vma