未成熟睪丸組織體外生殖細胞發(fā)育的實驗研究.pdf

1、目的：建立睪丸組織體外培養(yǎng)模型，比較胎牛血清(FBS)和血清替代物-KnockoutTMSR(KSR)對睪丸組織生長發(fā)育的影響，觀察SD大鼠和人未成熟睪丸組織在體外培養(yǎng)條件下生殖細胞發(fā)育情況。
　　方法：
　?、賁D大鼠未成熟睪丸組織分別采用FBS和KSR連續(xù)培養(yǎng)5周，觀測培養(yǎng)睪丸組織大體面積，蘇木素-伊紅（HE）染色觀察睪丸組織學形態(tài)及生殖細胞發(fā)育，并測量曲細精管直徑。TUNEL凋亡實驗觀察培養(yǎng)5周睪丸組織中的凋亡細胞，R

2、T-PCR檢測精子發(fā)生不同階段的標記基因Kit、Sycp3、Crisp1。
　?、谌〔G丸腫瘤術中的瘤旁睪丸組織進行體外培養(yǎng)，分別培養(yǎng)4w-17w，蘇木素-伊紅(HE)染色觀察培養(yǎng)睪丸組織的組織學結構，測量曲細精管橫截面積和直徑，RT-PCR檢測Piwil2基因在培養(yǎng)組織中的表達，免疫組化檢測Piwil2蛋白在生殖細胞中的表達。
　　結果：
　?、貹SR組睪丸組織體外持續(xù)生長，曲細精管逐漸增大，培養(yǎng)5周觀察到精原細胞、初

3、級精母細胞、次級精母細胞、圓形精子細胞， RT-PCR檢測到Kit、Sycp3、Crisp1的表達。FBS組睪丸組織隨著培養(yǎng)時間延長逐漸萎縮，培養(yǎng)5周曲細精管中出現(xiàn)明顯壞死，培養(yǎng)睪丸組織中Sycp3、Crisp1表達不穩(wěn)定。
　?、谌瞬G丸組織培養(yǎng)初期(4w)曲細精管橫截面積和直徑逐漸增大，培養(yǎng)后期有減小趨勢。培養(yǎng)8w后曲細精管中觀察到類初級精母細胞，Piwil2免疫組化染色提示生殖細胞具有自我更新分化能力。
　　結論：