核酸擴(kuò)增技術(shù)在血液篩查中的應(yīng)用研究.pdf

1、背景：輸血傳播性感染是重大的醫(yī)學(xué)問題,為輸血治療的主要安全隱患之一。除乙型病毒性肝炎(Hepatitis B virus,HBV)、丙型病毒性肝炎(Hepatitis C virus,HCV)、人類免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiency virus,HIV)外,有新型病毒與寄生蟲感染被確定與輸血相關(guān),也不斷有新的檢測方法被應(yīng)用于血液篩查。
　　 目的：比較酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme-linked immun

2、osorbentassay,ELISA)和核酸擴(kuò)增技術(shù)(Nucleic acid amplification testing,NAT)對成都市無償獻(xiàn)血者HBV、HCV和HIV的篩查效果,對核酸擴(kuò)增技術(shù)在血液篩查應(yīng)用情況進(jìn)行分析,評價其應(yīng)用價值,并為今后無償獻(xiàn)篩查中開展常規(guī)NAT的推廣應(yīng)用提供參考依據(jù)。
　　 方法：以成都市血液中心2010年9月20日至2011年3月9日期間的68344名無償獻(xiàn)血者為研究對象,肘靜脈取血經(jīng)乙二胺四

3、乙酸抗凝后分離血漿,利用ELISA對血樣HBV、HCV、HIV和梅毒螺旋體感染情況分別用國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑進(jìn)行初檢和復(fù)檢,并檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine transaminase,ALT)水平。對于ELISA兩次檢驗為陰性并且ALT≤40U/L的血樣,利用COBASs201系統(tǒng)(Roche diagnostics,COBAS(R)AmpliPrep(R)/TaqMan(R))的Hamilton STAR混樣儀進(jìn)行6人份血樣混合、COB

4、AS Ampliprep核酸純化加樣儀自動提取DNA或RNA、COBAS TaqMan熒光PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增、PDM Server服務(wù)器進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,完成對HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的核酸檢測。若6人份混樣的微匯集池NAT(Minipool-NAT)呈反應(yīng)性,分拆行單樣本NAT(Individual-NAT,ID-NAT)檢測反應(yīng)性樣本,以COBASTaqScreen MPX檢測試劑盒確認(rèn)檢測。
　　 結(jié)

5、果：ELISA檢測結(jié)果顯示,68344名無償獻(xiàn)血者的血樣中有94.84％(64820/68344)的血漿病毒反應(yīng)呈陰性,其余5.16%(3524/68344)的血樣經(jīng)國產(chǎn)或/和進(jìn)口試劑檢驗呈陽性。3524份ELISA檢測陽性的血樣中,22.36%(788/3524)的血樣乙肝表面抗原(HBsAg)檢測為陽性,21.03%(741/3524)抗-HCV檢測陽性,5.62%(198/3524)抗-HIV檢測陽性,22.59%(796/352

6、4)抗-TP檢測陽性,28.41%(1001/3524)的血樣ALT≥40U/L。對ELISA兩次檢測反應(yīng)呈陰性的64820份標(biāo)本中容量為200,300ml的22139份標(biāo)本進(jìn)行NAT檢測,6人份混合樣本NAT反應(yīng)呈陽性為31份,經(jīng)拆分單樣本NAT檢測后陽性數(shù)為19份,ELISA漏檢率為0.086%(19/22139)。19份NAT檢測反應(yīng)呈陽性的血樣經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心鑒定顯示,HBV DNA陽性率為84.21%(16/19),HCV陽性