基于微流控芯片技術(shù)的微量核酸擴(kuò)增應(yīng)用研究.pdf

1、微流控芯片技術(shù)（Microfluidics）是一種在微通道內(nèi)對微流體進(jìn)行精密操控的實驗技術(shù)。該技術(shù)可將化學(xué)、生物等領(lǐng)域中所涉及的多種反應(yīng)步驟高度集成在一塊微小的芯片上（μm2~cm2），以其精確的樣本控制、微量的試劑損耗、良好的生物相容性、較高的反應(yīng)效率和分析通量、較低的生產(chǎn)成本、高度集成自動化等特點，廣泛應(yīng)用于基因組測序、疾病診斷與治療、藥物合成和篩選等領(lǐng)域，是21世紀(jì)最為重要的前沿性分析技術(shù)之一。
　　隨著精準(zhǔn)醫(yī)療計劃的啟動，

2、人類對腫瘤的探索已不僅僅局限于腫瘤大體表型的研究，基于腫瘤基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白組等微量樣本分子層面的深入研究將有助于從根本上發(fā)現(xiàn)腫瘤的衍生機(jī)制、進(jìn)化過程和特異靶點。那么，如何對這些微量樣本予以更準(zhǔn)確、更高效、更廉價的檢測和實驗，是腫瘤學(xué)研究需要解決的首要問題。
　　本研究以微流控芯片技術(shù)的設(shè)計和加工為出發(fā)點，應(yīng)用模塑法成功制備了PDMS材料的液滴微流控芯片并搭建了標(biāo)準(zhǔn)化的液滴微流控芯片系統(tǒng)；通過液滴制備實驗，發(fā)現(xiàn)在確定微通道結(jié)構(gòu)和

3、兩相溶液粘度系數(shù)的情況下，影響液滴制備的因素主要為連續(xù)相與分散相的流速比例，并確定了相關(guān)液滴制備屬性的預(yù)測公式以對該系統(tǒng)進(jìn)行靈活的控制；應(yīng)用該系統(tǒng)可制備高度均一的液滴（CV％<5%），同時液滴體積靈活可控（0.81 pL~0.26 nL,11.56μm~78.94μm），且較快的制備速率使其具有高通量應(yīng)用特性（103~106 droplets/min）；最后，我們通過應(yīng)用該系統(tǒng)對微量核酸進(jìn)行qPCR擴(kuò)增實驗，發(fā)現(xiàn)該系統(tǒng)與傳統(tǒng)qPCR實驗