基于微流控芯片的臨床基因診斷應用研究.pdf

1、本論文工作以微流控芯片為基本研究平臺，發(fā)展用于疾病診斷的基因檢測技術，為微流控芯片技術用于臨床檢測作出有益的嘗試。
　　 論文研究內(nèi)容包括：
　　 1.聯(lián)合多重聚合酶鏈反應與微流控芯片電泳對人乳頭瘤病毒進行基因分型。
　　 目的: 建立人乳頭瘤病毒的芯片電泳基因分型方法，初步探討其對于宮頸高度病變診斷的臨床價值。
　　 方法: 利用多重聚合酶鏈反應聯(lián)合芯片電泳檢測114例婦女宮頸上皮細胞10種HPV感染狀

2、況，采用相對遷移時間比例的方法能夠精確計算待測DNA片段長度，實現(xiàn)HPV基因型的準確判斷。結(jié)果與導流雜交法進行比較，參考組織病理學檢測結(jié)果，評價其針對宮頸高度病變（≥宮頸上皮內(nèi)瘤變2級）診斷的臨床價值。
　　 結(jié)果: 芯片電泳方法能夠在3分鐘內(nèi)實現(xiàn)10種HPV基因亞型特異性擴增片段的分離。114例宮頸上皮細胞樣本中，芯片電泳法檢測HPV總感染率為66.7％（76/114），其與導流雜交法檢測結(jié)果總符合率為90.4％（103/11

3、4），（Kappa=0.795，P>0.05）。10種常見的HPV基因型按檢出率遞順序依次為：58、16、52、11、33、31、18、59、6、45。診斷宮頸高度病變的敏感性為87.5％，特異性為37.8％。
　　 結(jié)論: 芯片電泳法用于人乳頭瘤病毒基因分型檢測快速、可靠，適合于臨床樣本篩查。
　　 2.CD式微流控芯片用于苯丙酮尿癥基因突變檢測。
　　 目的：發(fā)展一種離心力驅(qū)動往復流式DNA雜交微流控芯片技術

4、，用于苯丙酮尿癥快速篩查。
　　 方法：設計并加工一種具有12個微通道的CD式微流控芯片。芯片采用聚二甲基硅氧烷－玻璃雙層結(jié)構，分別含有微通道和水凝膠結(jié)合探針區(qū)。探針區(qū)包括R243Q、V245V和陰性對照。將苯丙氨酸羥化酶基因外顯子7擴增產(chǎn)物加入芯片的進樣孔，在離心力的作用下進入雜交通道區(qū)。芯片在離心機中交替旋轉(zhuǎn)或暫停，通道內(nèi)液體由于離心力與毛細管作用力形成往復流以提高DNA雜交速度。雜交后將芯片置于熒光顯微鏡下觀察結(jié)果，陽性結(jié)