噬菌蛭弧菌對(duì)臨床分離細(xì)菌的捕食能力研究.pdf

1、目的：
　　了解臨床分離的五種常見(jiàn)細(xì)菌:大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌的耐藥特性，分析噬菌蛭弧菌對(duì)五種細(xì)菌浮游狀態(tài)及形成的生物膜的捕食能力，為減緩目前微生物耐藥現(xiàn)狀、尋求新的治療對(duì)策提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.VITEK(R)2型全自動(dòng)微生物分析儀、瓊脂稀釋法、MTS法分析2013～2014年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離的五種常見(jiàn)細(xì)菌:大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假

2、單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌的耐藥特性。
　　2.根據(jù)藥敏結(jié)果，將每種臨床分離菌分為兩組:多重耐藥組、非多重耐藥組。采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣的方法從各組中各挑選25株菌（共250株菌）分別與噬菌蛭弧菌ATCC43826共同震蕩培養(yǎng)一段時(shí)間，酶標(biāo)儀檢測(cè)各組OD600值，研究噬菌蛭弧菌對(duì)臨床分離菌浮游狀態(tài)的捕食能力。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
　　3.通過(guò)生物膜形成表型及相關(guān)基因型篩選，確定各多重耐藥組中的生物膜形成陽(yáng)性菌株。分別與噬菌

3、蛭弧菌ATCC43826共同置于96-孔細(xì)胞培養(yǎng)板中靜置孵育一段時(shí)間，酶標(biāo)儀檢測(cè)各組生物膜形成情況，研究噬菌蛭弧菌阻止菌株形成生物膜的能力。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
　　4.各生物膜形成陽(yáng)性菌株置于96-孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)并形成生物膜后，分別與噬菌蛭弧菌ATCC43826共同孵育，酶標(biāo)儀檢測(cè)各組生物膜被清除的程度，研究噬菌蛭弧菌消除菌株預(yù)形成的生物膜的能力，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
　　5.掃描電鏡觀察各標(biāo)準(zhǔn)菌株預(yù)形成的生物膜被噬菌蛭弧

4、菌捕食后的形態(tài)。
　　結(jié)果：
　　1.藥敏分析結(jié)果表明:大腸埃希菌對(duì)阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南、亞胺培南、頭孢替坦仍保持較高的敏感率;肺炎克雷伯菌對(duì)阿米卡星、厄他培南、亞胺培南、頭孢替坦保持較高的敏感率;銅綠假單胞菌對(duì)妥布霉素、阿米卡星敏感率較高;鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)所測(cè)定的各類(lèi)抗菌藥物的耐藥率均在50％以上;金黃色葡萄球菌對(duì)替考拉寧、萬(wàn)古霉素、替加環(huán)素、利奈唑胺、鏈陽(yáng)菌素、夫西地酸的耐藥率仍保持在較低水平。
　

5、　2.噬菌蛭弧菌分別與五種臨床常見(jiàn)菌共同培養(yǎng)24h及48h后，多重耐藥組、非多重耐藥組浮游狀態(tài)的OD600值與其初始OD600值相比均顯著降低，差異均具有顯著性。
　　3.研究共篩選得到生物膜形成表型、基因型均陽(yáng)性的大腸埃希菌16株，肺炎克雷伯菌23株，銅綠假單胞菌23株，鮑曼不動(dòng)桿菌23株，金黃色葡萄球菌18株。各菌株與噬菌蛭弧菌共同孵育24h后形成的生物膜吸光度（OD570值）與其對(duì)應(yīng)的空白對(duì)照組相比，降低了14.4％～44.

6、3％。48h后形成的生物膜吸光度（OD570值）與其對(duì)應(yīng)的空白對(duì)照組相比，降低了20.4％～65.2％。
　　4.各實(shí)驗(yàn)菌株預(yù)形成的生物膜被噬菌蛭弧菌捕食24h后，吸光度（OD570值）與其對(duì)應(yīng)的空白對(duì)照組相比，降低了72.2％～77.6％。48h后各組生物膜吸光度（OD570值）與其對(duì)應(yīng)的空白對(duì)照組相比，分別降低了79.9％～83.4％。
　　5.大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC13883、銅綠假單胞菌A

7、TCC27853、鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC19606、金黃色葡萄球菌ATCC25923培養(yǎng)24h后預(yù)形成的生物膜，經(jīng)空白對(duì)照組處理后掃描電鏡下仍可見(jiàn)細(xì)菌密集排列，層層疊加，團(tuán)塊內(nèi)包含大量的生物膜，僅部分區(qū)域略有縫隙。經(jīng)噬菌蛭弧菌捕食24h后的實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)生物膜的緊密結(jié)構(gòu)被破壞，生物量明顯減少，僅部分區(qū)域殘存聚集的細(xì)菌。
　　結(jié)論：
　　1.本研究中臨床分離的五種常見(jiàn)細(xì)菌:大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、金黃色