Gsdma3基因在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中對(duì)Wnt5a, E-cadherin,NF-κB表達(dá)影響的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　Gsdma3基因是Gsdm基因家族中位于小鼠第11號(hào)染色體的亞家族Gsdma基因家族成員之一,Gsdma基因家族成員同視黃酸受體α及角質(zhì)蛋白1的編碼基因緊鄰。Gsdma3基因存在的熱點(diǎn)突變區(qū)域能分別產(chǎn)生6種Gsdma3突變體,Bsk, Dfl, Rco2, Fgn, Rex-denuded和Rim3,這6種突變體在皮膚上皮組織中會(huì)引起毛囊周期中第一次生長(zhǎng)期的延長(zhǎng),皮膚的過(guò)度增生,并使得皮膚產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。經(jīng)典W

2、nt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)皮膚上皮細(xì)胞的增殖,分化具有重要的調(diào)節(jié)作用,而我們前期研究結(jié)果提示, Gsdma3基因同經(jīng)典 Wnt/β-catenin信號(hào)通路在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中存在關(guān)聯(lián),所以本研究的目的在于:
　　1、初步探明在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsdma3基因?qū)σ种平?jīng)典 Wnt/β-catenin信號(hào)通路的Wnt5a表達(dá)的影響。
　　2、初步探明在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsdma3基因?qū)σ种平?jīng)典 Wnt/β-cate

3、nin信號(hào)通路的E-cadherin表達(dá)的影響。
　　3、初步探明在小鼠皮膚上皮細(xì)胞中,Gsdma3基因?qū)δ軌蚺cβ-catenin蛋白形成激活蛋白復(fù)合體的NF-κB蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1、本研究利用 C57BL/6J小鼠,Gsdma3基因突變鼠及 Gsdma3基因表達(dá)質(zhì)粒等材料,通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、組織切片、免疫熒光、RT-PCR、WB等技術(shù)手段,在 Gsdma3基因突變及突變挽救后,分析在體小鼠皮膚上皮細(xì)胞中

4、,Gsdma3基因?qū)?Wnt5a, E-cadherin,NF-κB表達(dá)變化的影響情況。
　　2、利用體外培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細(xì)胞和 Gsdma3基因表達(dá)質(zhì)粒,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光、RT-PCR、WB等技術(shù)手段,在離體水平上分析了培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細(xì)胞Gsdma3基因過(guò)表達(dá)后,Gsdma3基因?qū)?Wnt5a,E-cadherin,NF-κB表達(dá)變化的影響情況。
　　結(jié)果:
　　1、在體水平上,免疫熒光結(jié)果顯示,

5、Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細(xì)胞中Wnt5a的表達(dá)上調(diào);Gsdma3基因突變鼠進(jìn)行Gsdma3基因表達(dá)挽救后,Wnt5a的表達(dá)下調(diào)。同樣,在7周 C57BL/6J小鼠毛囊周期同步化的背部皮膚上皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá) Gsdma3基因后也會(huì)引起Wnt5a的表達(dá)下調(diào)。
　　在離體水平上,RT-PCR, Western blot結(jié)果顯示,在培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Gsdma3基因后,Wnt5a的表達(dá)呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)。
　　2、在體水平

6、上,免疫熒光,RT-PCR, Western blot結(jié)果顯示,Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細(xì)胞中 E-cadherin的表達(dá)在突變鼠中具有顯著的上調(diào)現(xiàn)象;Gsdma3基因突變鼠進(jìn)行Gsdma3基因表達(dá)挽救后,E-cadherin的表達(dá)下調(diào)。同樣,在7周C57BL/6J小鼠毛囊周期同步化的背部皮膚上皮細(xì)胞過(guò)表達(dá) Gsdma3基因后也會(huì)引起 E-cadherin的表達(dá)下調(diào)。
　　在離體水平上,免疫熒光,RT-PCR, Wester

7、n blot結(jié)果顯示,在培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Gsdma3基因后E-cadherin的表達(dá)具有顯著的下調(diào)現(xiàn)象。
　　3、在體水平上,免疫熒光,RT-PCR, Western blot結(jié)果顯示,Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細(xì)胞中NF-κB的表達(dá)具有顯著的上調(diào)現(xiàn)象。
　　在離體水平上,免疫熒光,RT-PCR, Western blot結(jié)果顯示,在培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Gsdma3基因后NF-κB的表達(dá)具有顯著的