基于新型介孔硅球共載藥納米復(fù)合物的構(gòu)建及其逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥作用初步研究.pdf

1、乳腺癌是發(fā)生在乳腺上皮組織的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅全球女性身心健康甚至危及生命，發(fā)病率在美國女性惡性腫瘤中居于首位。近年來我國乳腺癌發(fā)病率的增長速度高出高發(fā)國家1～2個(gè)百分點(diǎn)，特別是其發(fā)病有年輕化的趨勢，乳腺癌已經(jīng)成為現(xiàn)代社會(huì)重大公共衛(wèi)生問題。腫瘤耐藥是導(dǎo)致乳腺癌化療失敗的主要原因，也是影響乳腺癌患者預(yù)后的重要因素，因此能夠克服或逆轉(zhuǎn)乳腺癌腫瘤化療耐藥的新方法的研究，成為當(dāng)前治療耐藥乳腺癌的關(guān)鍵探索方向。本課題采用現(xiàn)代納米技術(shù)基于磁性介孔二

2、氧化硅納米材料構(gòu)建出腫瘤雙重靶向和pH響應(yīng)釋藥的多藥共載復(fù)合納米載體，實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向的化療/光動(dòng)力聯(lián)合治療與自噬抑制劑聯(lián)合應(yīng)用，并且能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤靶向傳遞及控制釋藥，有效提高腫瘤組織藥物濃度，降低全身毒副作用。本課題的研究內(nèi)容主要包括以下三部分：
　　在第一章研究中，首先采用改進(jìn)St(o)ber方法合成了具有雙孔道核殼結(jié)構(gòu)的介孔二氧化硅納米粒，MSN粒徑大小約為100nm，形貌規(guī)整呈球形，且分散性較好，總孔容為2.47cm3/g，孔徑

3、為5.36nm，較大的比表面積和孔容，使MSN能夠有效負(fù)載大量的藥物。其次在氨基化MSN表面通過親核取代修飾嵌合超順磁性氧化鐵納米粒，構(gòu)建了磁性介孔二氧化硅納米粒。然后以DCC為縮合劑酰胺化共價(jià)結(jié)合光敏劑Ce6，同時(shí)負(fù)載BCRP抑制劑Ko143，并交聯(lián)高分子聚合物FA-PEG-b-PAsp，最后負(fù)載抗腫瘤藥物DOX，完成了共載藥納米復(fù)合物Ce6@MMSN/DOX/Ko143@PAsp-b-PEG-FA的構(gòu)建。共載藥納米復(fù)合物DOX的載藥

4、量為21.76％，pH相應(yīng)性釋藥研究表明其具有pH敏感控制釋放性能，在弱酸性條件下60h時(shí)，DOX累積釋放率高達(dá)80.53％，pH響應(yīng)性釋藥能夠有效降低DOX在正常組織的釋放，同時(shí)在腫瘤組織定向釋藥、增加腫瘤組織中藥物濃度，能夠更高效地發(fā)揮抗腫瘤作用;通過磁滯回線測試儀檢測構(gòu)建的共載藥納米復(fù)合物的磁飽和強(qiáng)度為5.3emu/g，結(jié)果顯示其具有良好的超順磁性，可以達(dá)到良好的磁靶向效果。
　　在第二章研究中，從細(xì)胞水平評價(jià)了共載藥納米復(fù)

5、合物對乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞的增殖抑制及逆轉(zhuǎn)作用。熒光顯微鏡、生物透射電鏡及流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示共載藥納米復(fù)合物具有良好的磁靶向性、葉酸靶向性及細(xì)胞攝取能力;根據(jù)CCK-8及流式細(xì)胞儀的檢測結(jié)果可知共載藥納米復(fù)合物對MCF-7/ADR細(xì)胞的抑制作用存在著濃度依賴性，化療/光動(dòng)力聯(lián)合治療具有一定的協(xié)同作用，其IC50值為4.23μg/ml，而游離DOXIC50值高達(dá)363.2μg/ml，共載藥納米復(fù)合物可以顯著逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)

6、胞耐藥，有效誘導(dǎo)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡或死亡;Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明共載藥納米復(fù)合物可以有效抑制MCF-7/ADR細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及遷移。
　　在第三章研究中，利用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過觀察腫瘤體積、腫瘤重量、裸鼠體重、生存周期評價(jià)共載藥納米復(fù)合物對阿霉素耐藥乳腺癌的治療作用。采用在BABL/c裸鼠第四乳腺脂肪墊上注射MCF-7/ADR細(xì)胞的方法建立了耐藥乳腺癌移植瘤模型;普魯士藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明共載藥納米復(fù)合物具有良好的體內(nèi)磁靶向性

7、;裸鼠血液生化參數(shù)及HE染色檢測結(jié)果顯示共載藥納米復(fù)合物的體內(nèi)毒性小;裸鼠腫瘤體積和腫瘤重量表明共載藥納米復(fù)合物具有顯著的抑制腫瘤生長作用，生存曲線結(jié)果顯示共載藥納米復(fù)合物能夠延長裸鼠生存時(shí)間，施加磁場共載藥納米復(fù)合物組腫瘤體積和重量最小，生存期相對最長，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明共載藥納米復(fù)合物具有良好的體內(nèi)耐阿霉素乳腺癌治療效果且毒副作用小。
　　綜上所述，本研究成功構(gòu)建了具有腫瘤雙重靶向及pH響應(yīng)性釋藥共載藥納米復(fù)合