冰片促進(jìn)葛根素、梓醇口服吸收入腦的配伍劑量及給藥系統(tǒng)研究.pdf

1、腦卒中嚴(yán)重威脅人類健康。課題組前期研究結(jié)果表明，葛根素、梓醇配伍具有改善神經(jīng)功能癥狀、促腦血管和神經(jīng)元再生的作用，對(duì)缺血性腦卒中的恢復(fù)期治療具有較好的療效，因此擬開(kāi)發(fā)葛根素、梓醇復(fù)方口服制劑。為克服血腦屏障對(duì)藥物穿透入腦的阻礙作用及葛根素水溶性差、口服難吸收2大難題，本研究在處方中加入能“引藥上行”的冰片，并采用自微乳技術(shù)和包合技術(shù)進(jìn)行制劑設(shè)計(jì)，完成的主要工作有：
　　（1）建立了藥物的含量測(cè)定方法。①葛根素、梓醇在細(xì)胞滲透液中的

2、含量測(cè)定（HPLC）；②小鼠血漿和腦組織中葛根素、梓醇的含量測(cè)定（HPLC-MS/MS）；③包合物中葛根素、梓醇的含量測(cè)定（HPLC）和冰片的含量測(cè)定（GC）④自微乳中葛根素、梓醇的含量測(cè)定（HPLC）和冰片的含量測(cè)定（GC）。按照藥典規(guī)定，進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，均符合藥典規(guī)定，可用于各情況下藥物的定量檢測(cè)。
　?。?）分別從細(xì)胞水平和動(dòng)物水平進(jìn)行冰片配伍劑量的篩選。①細(xì)胞水平：采用原代大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)7

3、d，建立體外血腦屏障模型，利用此模型研究濃度為6.25μg·mL-1~100μg·mL-1冰片對(duì)葛根素、梓醇轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。與未加入冰片組相比，冰片濃度為12.5μg·mL-1~100μg·mL-1時(shí)，葛根素、梓醇跨共培養(yǎng)模型的滲透系數(shù)顯著增大（P<0.01），冰片作用于共培養(yǎng)模型2 h后的跨內(nèi)皮細(xì)胞電阻值極顯著降低（P<0.05）。②動(dòng)物水平：小鼠分別灌胃給予0.025g·kg-1、0.05g·kg-1和0.1g·kg-1冰片溶液后再立即

4、灌胃葛根素、梓醇納米晶混懸液，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)血漿、腦組織中葛根素和梓醇的濃度，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。小鼠灌胃0.05g·kg-1和0.1g·kg-1冰片后能顯著促進(jìn)葛根素的口服吸收，但冰片對(duì)梓醇的口服吸收無(wú)顯著影響。就腦組織AUC而言，葛根素以0.1g·kg-1組最大，顯著高于其余各組（P<0.01）；梓醇以0.05g·kg-1組最大，但與0.1g·kg-1組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。由此確定冰片的配伍劑量為0.1g·kg-1。
　

5、?。?）制備了葛根素、梓醇和冰片的復(fù)方自微乳與包合物。①自微乳：測(cè)定葛根素、冰片在不同油相和表面活性劑中的飽和溶解度，篩選出溶解度較大的輔料，結(jié)合輔料的配伍情況，構(gòu)建偽三元相圖，選擇形成較大微乳區(qū)的處方，通過(guò)測(cè)定自微乳處方對(duì)葛根素和冰片的溶解度、微乳的粒徑和zeta電位從中確定最優(yōu)處方。最終制得2個(gè)較優(yōu)的自微乳，其制備工藝分別為：(A)自微乳（吐溫-80）：精密稱取10.00g Capmul MCM、16.00g吐溫-80、4.00g

6、Labrasol和20.00g1，2-丙二醇，37℃攪拌混勻，加入0.50g葛根素、0.25g冰片，繼續(xù)攪拌至藥物完全溶解后加入0.11g梓醇，攪勻，即得。(B)自微乳（RH-40）：精密稱取10.00g Capmul MCM、13.40g RH-40、13.40g Labrasol和13.40g1，2-丙二醇，37℃攪拌均勻，加入0.50g葛根素、0.25g冰片，繼續(xù)攪拌至藥物完全溶解，再加入0.11g梓醇，攪勻，即得。制得的2種自微

7、乳中葛根素、梓醇和冰片的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均分別為10mg·mL-1、2.2mg·mL-1和5mg·mL-1。自微乳（吐溫-80）和自微乳（RH-40）的粒徑分別為（151.6±1.92）nm和（25.37±1.60）nm，Zeta電位分別為（-4.73±0.38）mV和（-7.18±0.42）mV。②包合物：包合物以HP-β-CD作為包合材料，采用冷凍干燥法制備；通過(guò)包合量、DSC和X射線衍射研究包合機(jī)理。結(jié)果顯示，難溶性藥物葛根素和冰片在包合

8、過(guò)程中存在競(jìng)爭(zhēng)，葛根素競(jìng)爭(zhēng)性更強(qiáng)；水溶性藥物梓醇能與HP-β-CD復(fù)合但不影響葛根素和冰片的包合。由此確定最終的包合工藝為：制備40％的HP-β-CD溶液50mL，加入0.50g葛根素和0.25g冰片，超聲30min，再加入0.11g梓醇，超聲至完全溶解，即得。制得的包合物中葛根素和冰片可包入到HP-β-CD的空穴中，包合率均為100%；梓醇可與HP-β-CD空腔結(jié)構(gòu)開(kāi)口處的羥基復(fù)合，復(fù)合率為100%。包合物溶液中，葛根素、梓醇和冰片的

9、藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為10mg·mL-1、2.2mg·mL-1和5mg·mL-1。
　?。?）比較了2種自微乳和包合物經(jīng)小鼠灌胃后的吸收及入腦情況。自微乳（吐溫-80）和自微乳（RH-40）和包合物，灌胃劑量均為葛根素0.20g·kg-1，梓醇0.045g·kg-1，冰片0.10g·kg-1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：自微乳（吐溫-80）較其余各組更能顯著促進(jìn)葛根素的口服吸收（P<0.05），包合物較納米晶能顯著增加梓醇的口服吸收（P<0.01）

10、，其余各組之間均無(wú)顯著性差異（P>0.05）；就腦組織AUC而言，葛根素以自微乳（吐溫-80）組最大，顯著高于其余各組（P<0.01），梓醇以包合物組最大，但與自微乳組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　本研究在梓葛的組方中加入“引藥上行”的冰片，分別從細(xì)胞水平和動(dòng)物水平證實(shí)了冰片對(duì)葛根素、梓醇口服入腦的促進(jìn)作用，優(yōu)選了適宜的冰片配伍劑量。并制備了包合物和2種自微乳。研究結(jié)果顯示，冰片劑量為0.1g·kg-1，以吐溫-80為表面活