水稻ERF轉(zhuǎn)錄因子B-3亞組基因的功能分析.pdf

1、ERF(ethylene responsive factor)家族是AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子大家族的一個主要亞家族，在調(diào)節(jié)植物生物和非生物逆境反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。我們實(shí)驗(yàn)室在前期研究中，分離了一個來自水稻ERF B-3亞組的基因——OsBIERF3，研究表明過量表達(dá)OsBIERF3的煙草增強(qiáng)了對野火病、病毒病等病害的抗性。最近的研究也表明，許多ERF B-3亞組的基因在植物抗性反應(yīng)調(diào)控中發(fā)揮重要作用。
　　 本文擬克隆水稻ERF

2、B-3亞組基因，并采用過量表達(dá)技術(shù)和RNAi沉默技術(shù)研究其在植物抗性反應(yīng)中的功能。
　　 1.水稻ERF B-3亞組基因的鑒定與表達(dá)分析
　　 利用RT-PCR克隆鑒定了來自水稻ERF B-3亞組的15個基因，并對其在激素(ACC、JA)處理后的表達(dá)譜進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，大部分水稻ERF基因都能被ACC或JA誘導(dǎo)表達(dá)，但是不同基因在表達(dá)時序及表達(dá)量上存在差別。同時挑選了3個基因（OsBIERF3、Os08g44960、

3、Os04g46220）做轉(zhuǎn)錄因子活性分析，結(jié)果表明其均具有轉(zhuǎn)錄激活活性。
　　 2.水稻ERF B-3亞組基因過量表達(dá)載體和RNAi載體的構(gòu)建以及轉(zhuǎn)基因水稻的培育和鑒定
　　 分別構(gòu)建了15個已克隆基因的過量表達(dá)和RNAi沉默載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化技術(shù)對水稻進(jìn)行了轉(zhuǎn)化，獲得了OsBIERF3過量表達(dá)和RNAi沉默株系各27、20個，Os04g46220過量表達(dá)和RNAi沉默株系各15、6個，Os05g49010過

4、量表達(dá)和RNAi沉默株系各6、2個，Os02g45130過量表達(dá)株系10個。T1代潮霉素基因檢測大部分為陽性系。利用real-time PCR檢測過量表達(dá)和沉默植株中目的基因的表達(dá)量，均有不同程度的上調(diào)和下調(diào)。
　　 3.OsBIERF3抗逆生理功能分析
　　 分別研究了OsBIERF3 T1代過量表達(dá)和沉默植株在冷脅迫、鹽脅迫和干旱脅迫條件下的反應(yīng)。結(jié)果顯示，OsBIERF3沉默植株增強(qiáng)了水稻對冷脅迫的抗性，其死亡率顯