脊髓NLRP3炎癥小體對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　通過抑制NLRP3炎癥小體，觀察坐骨神經(jīng)慢性壓榨性損傷(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠機(jī)械痛敏變化，探討NLRP3炎癥小體對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的影響及機(jī)制。
　　方法：
　　Sprague-Dawley雄性大鼠36只，8周齡，體重250～300g，隨機(jī)分為4組（n=9）：假手術(shù)組（control組）、慢性坐骨神經(jīng)壓榨性損傷組（CCI組）、溶劑對(duì)照組（CCI-vehicl

2、e組）和抑制劑組（CCI-MCC950組）。分別于建模前1d、建模后1、4和7d測(cè)定機(jī)械縮足反應(yīng)閾（MWT）；CCI-vehicle組和CCI-MCC950組于建模后4d測(cè)定MWT后分別鞘內(nèi)注射等容積生理鹽水和MCC950溶液，每天1次，連續(xù)3天；于建模后7d MWT測(cè)量后處死大鼠取L4-6脊髓組織，采用Western blot法測(cè)定脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1β蛋白表達(dá)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定脊髓組織

3、NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1βmRNA表達(dá)，采用TdT介導(dǎo)dUTP末端標(biāo)記法（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling, TUNEL）檢測(cè)脊髓組織凋亡細(xì)胞，采用免疫熒光雙標(biāo)法觀察脊髓組織NLRP3與GFAP共表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　與control組比較，CCI組、CCI-vehicle組和CCI-MCC950組MWT顯著降低（P＜0.05），NLRP3、ASC、caspas

4、e-1和IL-1β蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）,凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)升高（P＜0.05）；與CCI組、CCI-vehicle組比較，CCI-MCC950組經(jīng)MCC950處理后MWT升高（P＜0.05），且脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白和mRNA表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少（P＜0.05）。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示：NLRP3蛋白主要表達(dá)于脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元胞漿。
　　結(jié)論：