經(jīng)H2O2預處理的骨髓間充質(zhì)干細胞移植對急性心梗后心室重構影響的實驗研究.pdf

1、目的：利用H2O2預處理骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，于心梗后急性期移植，研究其對急性心肌梗死后心室重構的影響，并對其機制進行初步的探討。
　　 方法：體外實驗：將第三代MSCs置入二十四孔板培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，分別予0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L H2O2預處理MSCs后培養(yǎng)72h，通過ELISA法測定MSCs上清液中血管內(nèi)皮生

2、長因子(vascular endothelium growthfactor，VEGF)、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)的濃度；另外，分別予H2O2預處理MSCs0h、12h、24h、36h、48h后培養(yǎng)72h，通過ELISA法測定MSCs上清液中VEGF、HGF的濃度。體內(nèi)試驗：20只健康太湖梅山豬，經(jīng)心導管用明膠海綿栓塞冠狀動脈左前降支(left anterior descending co

3、ronary artery，LAD)第二對角支建立豬的急性心肌梗死模型，隨機分為4組：A組(對照組)：心梗后24h通過介入方法在心梗區(qū)注射DMEM；B組(氧化干細胞上清液組)：心梗后24h注射經(jīng)H2O2預處理的MSCs的培養(yǎng)上清液；C組(干細胞組)：心梗后24h移植未經(jīng)處理的MSCs；D組(氧化干細胞組)：心梗后24h移植經(jīng)過H2O2預處理的MSCs。各組在不同時間點通過ELISA法測定血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis

4、 factor alpha，TNF-α)濃度。心梗前、心梗后24h、干細胞移植后4w行Powerlab+Millar壓力導管和磁共振檢測心功能指標。干細胞移植后4w獲取豬心，TTC法測量心梗面積，免疫組化染色檢測非梗死區(qū)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制酶-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1)的表達，并

5、通過vWF(vonWillebrand factor，vWF)免疫組化染色計數(shù)新生血管密度。
　　 結果：體外實驗：不同濃度H2O2預處理MSCs，20μmol/L組中VEGF、HGF的濃度較0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L組中明顯增高(p<0.05)；H2O2預處理MSCs不同時間，24h組中的VEGF、HGF的濃度較0h、12h、36h、48h組中明顯增高(p<0.05)。體內(nèi)試驗：D

6、組和B組同時間點血清TNF-α濃度較A和C組降低(p<0.05)。移植后4w D組和B組與A組相比，左室壓上升及下降最大速率(+dp/dtmax，-dp/dtmax)、左心室發(fā)展壓(left ventricular developed pressure，LVDP)以及舒張末期室壁厚度(end-diastolic wall thickness，EDWT)、每搏輸出量(stroke volume，SV)表達明顯上升(p<0.05)，同時心肌

7、MMP-9蛋白表達及心梗面積較A組明顯減少(p<0.05)，心肌TIMP-1蛋白表達和梗死周圍區(qū)毛細血管密度明顯增加(p<0.05)；且D與B組相比，D改善更為明顯(p<0.05)；C組上述指標較A組無明顯改善。
　　 結論：1、20μmol/L H2O2預處理MSCs24h能增強細胞因子VEGF、HGF的分泌。2、心梗后急性期移植H2O2預處理的MSCs，降低促炎因子的表達水平，減少心室基質(zhì)重構，改善梗死周邊區(qū)血供，從而抑制心