黏細(xì)菌轉(zhuǎn)錄因子FruA mRNA 5′非翻譯區(qū)的功能研究.pdf

1、目的：黏細(xì)菌是研究多細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)發(fā)生機(jī)制的良好模型。FruA是黏細(xì)菌發(fā)育所必需的一種轉(zhuǎn)錄因子，其mRNA5′端存在相當(dāng)長(zhǎng)的由235個(gè)核苷酸組成的非翻譯區(qū)(5′-UTR)，如此長(zhǎng)的5′-UTR在細(xì)菌乃至真核生物中并不多見。本項(xiàng)目通過(guò)對(duì)fruAmRNA5′非翻譯區(qū)的突變研究，明確5′-UTR在fruA表達(dá)中的作用。目前在轉(zhuǎn)錄后水平研究黏細(xì)菌基因表達(dá)調(diào)控鮮有報(bào)道，作為黏細(xì)菌多細(xì)胞形態(tài)發(fā)生和細(xì)胞分化關(guān)鍵性的蛋白因子之一，全面、準(zhǔn)確地闡明fruA

2、時(shí)空特異性表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制可以增進(jìn)對(duì)黏細(xì)菌這一模式生物發(fā)育程序分子調(diào)控的認(rèn)識(shí)。 方法：以lacZ為報(bào)告基因構(gòu)建了保留或缺失5′-UTR的2種fruA-lacZ翻譯融合體，此外，還對(duì)5′-UTR的4個(gè)區(qū)域進(jìn)行連續(xù)的缺失突變(△5-55，△56-109，△110-164，△165-220)。分別將6種fruA-lacZ翻譯融合體整合在野生型黃色黏細(xì)菌DK1622染色體的attB位點(diǎn)。這些fruA-lacZ翻譯融合體具有相同的啟動(dòng)子、啟

3、動(dòng)子上游調(diào)節(jié)元件和翻譯信號(hào)(SD序列及起始密碼子),lacZ均連接在fruA第6個(gè)密碼子下游，不同之處僅在于各自5′-UTR的完整性存在差異。Southern雜交確認(rèn)后測(cè)定β-半乳糖苷酶在發(fā)育進(jìn)程中的表達(dá)狀況，結(jié)合5′-UTR二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)來(lái)進(jìn)一步分析5′-UTR對(duì)fruA-lacZ表達(dá)調(diào)控的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。 結(jié)果：5′-UTR各種缺失突變經(jīng)DNA測(cè)序分析得到證實(shí)。Southem雜交分析表明，6種fruA-lacZ翻譯融合載體均準(zhǔn)確整合