擬南芥鋅指轉(zhuǎn)錄因子PLATZ5在鹽脅迫響應(yīng)中的功能研究.pdf

1、土壤鹽漬化是影響當(dāng)今農(nóng)作物產(chǎn)量和質(zhì)量的一個(gè)重要因素。土壤鹽分濃度過高會(huì)導(dǎo)致植物代謝紊亂，影響植物對(duì)必需元素的吸收，造成滲透脅迫及氧化脅迫等次生脅迫，進(jìn)而影響植物正常的生長發(fā)育。如何提高植物的耐鹽性已成為農(nóng)業(yè)發(fā)展急需解決的問題。
　　PLATZ（Plant A/T rich sequence-andzinc-binding protein）是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子，2002年豌豆PLATZ1首次被報(bào)道能非特異地結(jié)合富含A/T堿基的序

2、列并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制的作用。擬南芥中共有12個(gè)PLATZ成員，本研究對(duì)擬南芥AtPLATZ5進(jìn)行了表達(dá)分析和功能鑒定，結(jié)果如下：
　　（1）利用半定量RT-PCR和GUS染色的方法檢測(cè)了AtPLATZ5的組織表達(dá)模式，結(jié)果表明AtPLATZ5在各個(gè)組織中均有表達(dá)，且表達(dá)差異不大。RT-PCR和qRT-PCR的結(jié)果同時(shí)證明了AtPLATZ5的表達(dá)量受鹽脅迫誘導(dǎo)。
　?。?）利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)化煙草的方法對(duì) PLATZ5的亞細(xì)胞定位進(jìn)行了分

3、析，結(jié)果表明PLATZ5除在細(xì)胞核中表達(dá)外，在細(xì)胞質(zhì)中也有表達(dá)，這說明PLATZ5可能發(fā)揮多種功能。
　?。?）利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)對(duì)PLATZ5的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行了分析，結(jié)果表明PLATZ5具有轉(zhuǎn)錄抑制活性。
　?。?）對(duì)AtPLATZ5超表達(dá)株系進(jìn)行100mM和150mM NaCl處理，發(fā)現(xiàn)AtPLATZ5超表達(dá)株系地上部鮮重比對(duì)照分別降低了30％與50%，而根部的鮮重比對(duì)照分別降低了20%與18%，這表明鹽脅迫對(duì)AtPL

4、ATZ5超表達(dá)株系地上部抑制更明顯。提高NaCl濃度到200mM時(shí)，超表達(dá)株系葉片白化，存活率顯著低于野生型。這說明 AtPLATZ5負(fù)調(diào)控幼苗對(duì)鹽脅迫的抗性。AtPLATZ5超表達(dá)株系地上部也會(huì)對(duì)100mM NaNO3、100mM KCl和100mM KNO3脅迫處理表現(xiàn)出微弱敏感的表型，同時(shí)超表達(dá)株系對(duì)10mM LiCl超敏感而對(duì)甘露醇不敏感。以上結(jié)果表明AtPLATZ5主要響應(yīng)離子脅迫。
　?。?）插入到外顯子區(qū)的platz

5、5突變體對(duì)鹽脅迫處理沒有表型，表明PLATZ家族成員可能存在著功能冗余。
　?。?）鈉離子探針染色結(jié)果顯示超表達(dá)株系在受到鹽脅迫時(shí)根與葉片部積累的鈉離子增多，表明超表達(dá)株系體內(nèi)鈉離子的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)受到了影響。
　　（7）qRT-PCR分析鹽脅迫后超表達(dá)株系體內(nèi)信號(hào)通路marker基因的變化，發(fā)現(xiàn)SOS途徑的 SOS3/CBL4及其同源基因 CBL10表達(dá)量下調(diào)，而染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明PLATZ5能靶向SOS3啟動(dòng)子，這表明P