IBDV急性感染階段雞免疫抑制性受體及細胞因子的表達變化初步研究.pdf

1、PD-1與其配體PD-Ls屬于 B7-CD28超家族，最早在 T細胞雜交瘤細胞凋亡調(diào)節(jié)研究中發(fā)現(xiàn)。PD-1與PD-Ls結合后介導的抑制信號對T細胞的活化和耐受有重要的調(diào)節(jié)作用。阻斷PD-1與其配體（PD-Ls）的結合可以使病毒持續(xù)性感染時功能障礙或衰竭的CD8+ T細胞功能恢復。PD-1:PD-Ls通路能夠在中樞免疫和外周免疫反應中傳遞免疫耐受和免疫抑制信號，控制著細胞因子和抗體的產(chǎn)生、CTL的增殖活化及對自身抗原的耐受。在動物免疫抑制

2、性疾病或病毒持續(xù)性感染方面，T細胞免疫抑制性受體PD-1的研究才剛剛起步，特別是在家禽類該方面的研究還少見報道。
　　本課題以 IBDV感染后 T淋巴細胞表面免疫抑制性受體 PD-1及其配體PD-Ls為對象，研究其表達變化情況及其與機體免疫狀態(tài)的關系。根據(jù)GenBank中雞PD-1、PD-L1、PD-L2、IL-2、IL-6、IFN-γ以及參考基因β-actin的序列信息，分別設計特異引物擴增目的基因片段，得到各自陽性克隆質(zhì)粒，以

3、陽性質(zhì)粒作為標準品建立標準曲線，并進行敏感性、特異性和重復性試驗，建立上述基因的SYBR Green I實時熒光定量RT-PCR檢測方法。并利用所建立的方法對4周齡健康雛雞人工感染IBDV后第3、5、7、10天PBMC中PD-1及其配體PD-L1、PD-L2的表達變化情況進行檢測，同時檢測了與機體免疫調(diào)控相關的重要細胞因子IL-2、IL-6和IFN-γ的表達變化情況。分析在IBDV感染后，病毒在機體內(nèi)的復制、增殖與PD-1、PD-L1和

4、PD-L2表達變化之間的關系。
　　結果表明，建立的SYBR Green I實時熒光定量 RT-PCR檢測方法在1×101～1×109 copies/μL模板范圍內(nèi)具有良好的線性關系，可檢測至少101 copies/μL的陽性標準樣品，且具有較好的特異性和重復性。IBDV感染后，病毒在雛雞體內(nèi)復制逐漸增加，至第5天病毒載量達到峰值，隨后逐漸降低。免疫抑制性受體實時熒光定量RT-PCR檢測結果表明，PD-1及配體PD-L1、PD-L

5、2在病毒感染后表達量均有所升高，其中PD-1在病毒感染后第7-10天升高顯著，PD-L1、PD-L2均在病毒感染后第3-10天顯著升高（PD-L1， P<0.01;PD-L2，P<0.05）。病毒感染后部分免疫調(diào)節(jié)相關細胞因子檢測結果表明，在IBDV急性感染期（3-7d）IFN-γmRNA表達水平表達水平持續(xù)增高，當PD-1表達增高后（7天），IFN-γ表達水平開始急劇下降且變化顯著。IL-2和IL-6 mRNA表達水平都在IBDV感染

6、后第3天急劇升高，隨著感染的持續(xù)，IL-2和IL-6 mRNA表達水平持續(xù)降低（5-10天）。
　　本研究成功建立了雞PD-1及配體PD-L1、PD-L2和細胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ實時熒光定量RT-PCR檢測方法。應用該方法初步分析了IBDV感染后雞PD-1、PD-L1、PD-L2及細胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ的表達變化，發(fā)現(xiàn)IBDV感染后，PD-1及配體PD-L1、PD-L2的表達均升高，且PD-L1、P