基因重組糖蛋白-rhEPO的質(zhì)譜分析及麥胚凝集素親和色譜行為的考察.pdf

1、本論文以較高濃度的重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)原液為研究對(duì)象，建立了生物質(zhì)譜研究rhEPO一級(jí)結(jié)構(gòu)的系列方法，包括分子量、唾液酸含量以及N一糖含量等糖基化性質(zhì)的測(cè)定方法，并用于四種國(guó)產(chǎn)rhEPO樣品的分析：在此基礎(chǔ)上優(yōu)化酶切條件，使測(cè)定的肽質(zhì)量指紋譜(PMF)的覆蓋率均達(dá)到9896，成功鑒定了四種樣品中的全部N一糖基化位點(diǎn)以及對(duì)分子中兩對(duì)二硫鍵進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，此外還對(duì)四種產(chǎn)品在O一連接糖型及N一連接糖型上的區(qū)別做了初步探討，為建立

2、基于質(zhì)譜的快速高靈敏度的檢測(cè)方法奠定了一定的基礎(chǔ)，也為該類藥物的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。 麥胚凝集素是一種可以特異性與Aβ-卜4或β-卜2連接的N一乙酰葡萄糖胺及唾液酸親和作用的一種凝集素，在蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用于復(fù)雜體系中糖蛋白及糖肽的親和提取，達(dá)到簡(jiǎn)化體系、提高鑒定成功率的目的。本論文考察了將其用于簡(jiǎn)單蛋白混合體系中rhEPO親和提取的可行性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麥胚凝集素與rhEPO糖鏈有特異的親和作用，可以在簡(jiǎn)單的蛋白混合體