秦巴硒菇水浸物活性成分對血源細(xì)胞的正負(fù)調(diào)節(jié)作用.pdf

1、秦巴硒菇(Agaricus blazei Murrill-Qbsg)是在我國成功栽培的一種富含硒的食用菌。為了研究這一全新食用菌的水溶性成份對血液系統(tǒng)細(xì)胞的負(fù)調(diào)節(jié)和正調(diào)節(jié)作用，分別在4℃、25℃、60℃、100℃四種不同溫度下制備秦巴硒菇水浸物，并作用于早幼粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞(K562)，以獲得作用效果最佳的秦巴硒菇水浸物。在研究秦巴硒菇水浸物誘導(dǎo)K562凋亡的實(shí)驗(yàn)中，運(yùn)用四氮唑藍(lán)比色法(MTT法)、集落形成計(jì)數(shù)法、流式細(xì)胞檢測技術(shù)、瓊

2、脂糖凝膠電泳法、熒光顯微鏡、透射電子顯微鏡以及單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR）多種方法進(jìn)行了生物活性、生化檢測，形態(tài)學(xué)觀察及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的檢測。在研究秦巴硒菇水浸物對血源細(xì)胞系分化抗原的影響的實(shí)驗(yàn)中，采用了本實(shí)驗(yàn)室制備的免疫熒光納米微球(IFNB)及FACS進(jìn)行檢測。在本研究中，還應(yīng)用MTT法檢測熒光納米微球?qū)π∈蠊撬杓?xì)胞、K562細(xì)胞、Hela細(xì)胞是否具有毒性作用；并應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室制備的磁性納米粒子直接從細(xì)胞裂解液中分離

3、獲得提取mRNA的研究。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在四個(gè)不同溫度條件下制備的秦巴硒菇水浸物對K562腫瘤細(xì)胞的抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究中，發(fā)現(xiàn)60℃下制備的秦巴硒菇水浸物效果最佳，與對照組相比，具有顯著性差異(P<0.01)，且作用時(shí)間在24h～72h間，抑制率與作用時(shí)間呈正相關(guān)。通過FACS檢測其誘導(dǎo)K562腫瘤細(xì)胞72h時(shí)有明顯的亞二倍體峰出現(xiàn)；在形態(tài)學(xué)研究中觀察到K562腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)：膜起泡，細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)濃縮、邊集化形

4、成新月形結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生凋亡小體等。通過單細(xì)胞RT-PCR檢測法證明了秦巴硒菇水浸物可增強(qiáng)p53、Fas、Caspase-3等基因的表達(dá)活性。在秦巴硒菇水浸物對血源細(xì)胞系分化抗原影響的研究中發(fā)現(xiàn)，秦巴硒菇水浸物能有效地促進(jìn)人臍血單個(gè)核細(xì)胞中的造血干細(xì)胞向紅系、粒系、B細(xì)胞、T細(xì)胞分化。在檢測熒光納米微球?qū)?xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)室制備的熒光納米微球?qū)π∈蠊撬杓?xì)胞、K562、Hela細(xì)胞的生長均無明顯的毒性；通過RT-PCR進(jìn)行β-acti

5、n基因的擴(kuò)增最終證明本實(shí)驗(yàn)室制備的磁性納米粒子能有效地從裂解液中直接分離獲得mRNA，可用于擴(kuò)增基因。 因此，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)通過低溫萃取獲得的60℃下的秦巴硒菇水浸物中的活性成份具有可以誘導(dǎo)K562腫瘤細(xì)胞的凋亡和血源細(xì)胞系向不同譜系分化的正負(fù)兩種不同的調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)室制備的熒光納米微球?qū)?xì)胞的生長無明顯的毒性作用，為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了研究的前提；同時(shí)我們制備的磁性納米粒子也能有效地從裂解液中直接分離獲得mRNA，為mRNA的快速分