五種中藥的水提物主要成分對(duì)2BS細(xì)胞的抗衰老作用.pdf

1、背景與目的衰老是一種由遺傳因素和內(nèi)外環(huán)境多種復(fù)雜因素相互作用而引起的生物學(xué)過程,是生命周期中按照一定的規(guī)律發(fā)生在整體、器官、組織、細(xì)胞的形態(tài)功能的演變過程,表現(xiàn)為一系列隨增齡而顯示的全身性、漸進(jìn)性、衰退性的變化或紊亂。關(guān)于人體衰老,是一個(gè)久經(jīng)不衰的熱門話題。
　　長(zhǎng)期以來,人們對(duì)人體衰老的起因、機(jī)制進(jìn)行了不斷的探索和研究,但迄今為止仍是一個(gè)尚未完全解開的謎。探索衰老發(fā)生的機(jī)制既是一個(gè)古老的問題,又是一個(gè)嶄新的科研領(lǐng)域。隨著近年來中

2、醫(yī)藥學(xué)科的快速發(fā)展,以及人們崇尚自然養(yǎng)生理念的流行,使用中藥材或藥食兩用食材進(jìn)行養(yǎng)生延緩衰老擁有很好的研究前景。河南地域廣闊,地理位置特殊,地形復(fù)雜,南北氣候交錯(cuò),形成南北區(qū)域兼容并存的豐富中藥資源。大棗,金銀花,四大懷藥等產(chǎn)量豐富且質(zhì)優(yōu),對(duì)于其功效的研究有助于因地制宜的發(fā)展本地經(jīng)濟(jì)。中藥血清藥理學(xué)是在整體動(dòng)物給藥一段時(shí)間后,取含藥成分的血清代替中藥粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的一種方法。自從1991年我國(guó)國(guó)家中醫(yī)藥管理局對(duì)此立題以來,這項(xiàng)研究已

3、得到系統(tǒng)的開展。中藥血清藥理學(xué)的優(yōu)勢(shì)在于:體現(xiàn)了復(fù)方在體內(nèi)系列轉(zhuǎn)化效應(yīng),克服了藥物本身的理化性質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的直接干擾。細(xì)胞像其他生物體一樣,有一定的壽命。正常人的二倍體成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下,經(jīng)歷有限的分裂次數(shù),進(jìn)入一種不可逆的增殖停滯狀態(tài),即復(fù)制性衰老。這種在體外培養(yǎng)的細(xì)胞增殖傳代的能力,反應(yīng)了細(xì)胞在體內(nèi)的衰老狀況。因此,人二倍體成纖維細(xì)胞被公認(rèn)為研究細(xì)胞衰老的模型。
　　實(shí)驗(yàn)方法：1.水提物的制備及檢測(cè):對(duì)大棗,金銀花,山

4、藥,菊花,地黃進(jìn)行熱水浸提,取上清液減壓濃縮除脂醇沉,分別得其水提物。對(duì)各水提物進(jìn)行成分檢測(cè)分析,對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)其含量。采用鄰苯三酚自氧化法對(duì)各水提物進(jìn)行體外抗自由基能力測(cè)定。2.含藥血清的制備:日本大耳白兔雌性若干只,分為各藥物組、空白對(duì)照組。藥物組以適量水提物水溶液灌胃,空白對(duì)照組給予等量無菌動(dòng)物飲用水。末次給藥后頸動(dòng)脈取血,分離血清,滅活后無菌超凈臺(tái)濾膜過濾,-70℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.細(xì)胞培養(yǎng)及指標(biāo)檢測(cè):取20和40代齡的人胚肺

5、上皮成纖維細(xì)胞株(2BS細(xì)胞),分為:空白組、血清對(duì)照組、各藥物組,連續(xù)干預(yù)培養(yǎng)4代后用于后期實(shí)驗(yàn)。取經(jīng)處理后的各組細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡測(cè)定,細(xì)胞上清檢測(cè)抗氧化指標(biāo)。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:本研究所獲得數(shù)值型實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示。對(duì)于正態(tài)分布且方差齊的資料,采用方差分析,多組樣本之間的兩兩比較采用q檢驗(yàn)。而對(duì)于非正態(tài)分布的資料采用秩和檢驗(yàn),多組樣本之間兩兩比較采用基于秩次的M檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α

6、=0.05。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.通過對(duì)大棗,山藥,地黃,金銀花,菊花五種單方中藥進(jìn)行熱水浸提,分別得到其水提物,對(duì)水提物進(jìn)行成分檢測(cè)分析,在五種水提物中,大棗水提物總糖含量最高(43.20±0.46),菊花水提物總糖含量最低(20.03±0.49)。對(duì)水提物總黃酮進(jìn)行檢測(cè),金銀花水提物總黃酮含量最高(15.63±0.35),地黃水提物總黃酮含量最低(1.97±0.25)。對(duì)五種水提物進(jìn)行體外抗自由基能力測(cè)定,結(jié)果顯示:水提物清除超

7、氧陰離子自由基能力強(qiáng)弱順序?yàn)?大棗>地黃>山藥>金銀花>菊花,且隨著濃度的增加其清除率逐漸上升。2.五種山藥水提物均能促進(jìn)衰老細(xì)胞增殖;增加超氧化物歧化酶SOD的活性,降低脂質(zhì)過氧化物MDA的含量,改善自由基代謝。大棗和山藥水提物的作用最為明顯,菊花水提物的作用最不明顯。
　　結(jié)論:1.各藥物的水提物中均含有多糖、黃酮等眾多生物活性物質(zhì),結(jié)合以往的研究資料提示,這些物質(zhì)均具有抗氧化抗自由基的功能,且多種有效物質(zhì)的協(xié)同作用效果明顯。