臍血單個(gè)核細(xì)胞擴(kuò)增前后的骨髓基質(zhì)植入能力及條件研究.pdf

1、目的:模擬體內(nèi)造血微環(huán)境,植入體外擴(kuò)增和未擴(kuò)增的臍血干/祖細(xì)胞,探討臍血干/祖細(xì)胞和擴(kuò)增后祖細(xì)胞的植入能力,改善植入條件,提高移植效率,最終達(dá)到造血重建和免疫重建,為臍血干細(xì)胞移植成功應(yīng)用于成年患者提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:應(yīng)用體外細(xì)胞液體培養(yǎng)、混合集落培養(yǎng)(CFU-mix)及鑒定、細(xì)胞化學(xué)染色、流式細(xì)胞儀(FACS Calibur)分析檢測等技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn).①應(yīng)用密度梯度離心法獲得臍血的單個(gè)核細(xì)胞(mononuelear cell,MN

2、C),選用細(xì)胞因子組合液體培養(yǎng)體系對其進(jìn)行體外擴(kuò)增,預(yù)鋪設(shè)骨髓基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層(bone marrow stromal cell,BMSC),利用鋪展貼壁實(shí)驗(yàn)研究其植入能力.②擴(kuò)增前后臍血干/祖細(xì)胞植入能力研究的實(shí)驗(yàn)分組:A組為擴(kuò)增后細(xì)胞植入組(祖細(xì)胞);B組為未擴(kuò)增細(xì)胞植入祖(干/祖細(xì)胞);C組為混合細(xì)胞植入組(1/3A組+2/3B組).③改善植入條件研究的實(shí)驗(yàn)分組如下:A組為混合細(xì)胞組接種于臍血基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層;B組為混合細(xì)胞組接種于成

3、人正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層;C組為混合細(xì)胞組接種于急性白血病完全緩解骨髓基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層;D組為混合細(xì)胞組接種于經(jīng)堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)處理的急性白血病完全緩解骨髓基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層.結(jié)論:①不同密度梯度比重的淋巴細(xì)胞分離液分離臍血造血干/祖細(xì)胞具有不同效果,1.064g/L Ficoll-hypaque所分離的臍血造血細(xì)胞中CD34<'+>含量高,體外有較強(qiáng)的增殖能力.