人臍血單個(gè)核細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療新生大鼠腦癱模型的研究.pdf

1、目的：
　　 研究人臍血單個(gè)核細(xì)胞(hUCB)、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)、人臍血單個(gè)核細(xì)胞聯(lián)合臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCB聯(lián)合hUCMSCs)在新生大鼠腦癱模型中的治療作用，初步探討其治療的機(jī)理；比較不同的移植途徑和移植細(xì)胞種類對大鼠腦癱模型治療效果的差異，以期為臨床細(xì)胞治療小兒腦癱提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1)應(yīng)用類似Rice法即一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎結(jié)合缺氧的方法制作新生大鼠腦癱模型

2、，建模3周后，觀察其體重、行為學(xué)及腦組織病理變化。
　　 2)建立腦癱模型7天后，分別將1×106個(gè)hUCB以不同的移植方式（經(jīng)頸靜脈、經(jīng)腹腔）移植到大鼠體內(nèi)，細(xì)胞移植2周后，進(jìn)行體重分析、行為學(xué)分析(印記分析、步長分析、EBST)、組織病理學(xué)分析、免疫熒光染色分析。
　　 3)建立腦癱模型7天后，分別將1×106個(gè)不同種類的細(xì)胞(hUCB、hUCMSCs、hUCB聯(lián)合hUCMSCs)移植到大鼠體內(nèi)，細(xì)胞移植2周后，進(jìn)行

3、體重分析、行為學(xué)分析(印記分析、步長分析、EBST)、組織病理學(xué)分析、免疫熒光染色分析。
　　 結(jié)果：
　　 1)腦缺血損傷導(dǎo)致大鼠體重下降；趾距和步長減少；不對稱擺動(dòng)；損傷同側(cè)的大腦半球明顯液化，形成空洞，腦實(shí)質(zhì)明顯減少；腦冠狀切片顯示損傷同側(cè)的腦半球面積減少。
　　 2)經(jīng)頸靜脈或腹腔兩種移植途徑移植hUCB到大鼠腦癱模型體內(nèi)，均能增加大鼠的體重；增加趾距和步長；緩解不對稱擺動(dòng)；減輕腦組織損傷。損傷部位能檢測

4、到移植細(xì)胞，而且能檢測到表達(dá)星形膠質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記GFAP的移植細(xì)胞。并且從大腦解剖學(xué)觀察及腦冠狀切片兩腦半球的面積分析上看，經(jīng)頸靜脈移植對腦癱的治療效果優(yōu)于經(jīng)腹腔移植。
　　 3)經(jīng)頸靜脈單獨(dú)移植hUCB或單獨(dú)移植hUCMSCs或聯(lián)合移植hUCB和hUCMSCs，三種類型的細(xì)胞移植方案，均能增加大鼠的體重；增加趾距和步長；緩解不對稱擺動(dòng)；減輕腦組織損傷。損傷部位能檢測到移植細(xì)胞，而且能檢測到表達(dá)星形膠質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記GFAP的移植

5、細(xì)胞。并且從EBST、大腦解剖學(xué)觀察及腦冠狀切片兩腦半球的面積分析上看，聯(lián)合移植hUCB和hUCMSCs對腦癱的治療效果要優(yōu)于單獨(dú)移植hUCB或單獨(dú)移植hUCMSCs。
　　 結(jié)論：
　　 應(yīng)用一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎結(jié)合缺氧的方法制作新生大鼠腦癱模型穩(wěn)定、可靠；人臍血單個(gè)核細(xì)胞(hUCB)、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)具有治療新生大鼠腦癱模型的作用；經(jīng)頸靜脈移植對腦癱的治療效果優(yōu)于經(jīng)腹腔移植；聯(lián)合移植hUCB和hUCM