內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體內(nèi)FKBP23與BiP結(jié)構(gòu)域相互作用位點(diǎn)及FKBP23的X-射線晶體學(xué)研究.pdf

1、本文分為兩個部分：第一部分對小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體內(nèi)的親免蛋白FKBP23與免疫球蛋白結(jié)合蛋白BiP結(jié)構(gòu)域相互作用位點(diǎn)進(jìn)行了深入的研究；第二部分對FKBP23蛋白結(jié)晶條件的篩選和優(yōu)化進(jìn)行了初步探索，并對與抗癌藥物篩選相關(guān)的四個金屬配合物的晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。
　　 FKBP23屬于遺傳上高度保守的親免蛋白家族；具有肽脯氨酰順反異構(gòu)酶(PPIase)活性，是免疫抑制劑FK506和抗癌制劑雷帕霉素在哺乳動物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體內(nèi)的受體。本文研究的另一個蛋

2、白質(zhì)BiP是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中的重要的Hsp70分子伴侶，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中所有已知的生物功能，包括蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)間的轉(zhuǎn)運(yùn)和折疊、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及Ca2+的動態(tài)平衡等。
　　 第一部分研究首先以克隆蛋白質(zhì)FKBP23與BiP為研究對象，采用基因定點(diǎn)突變結(jié)合PHase活性和ATPase活性檢測，首次將PPIase對標(biāo)準(zhǔn)多肽構(gòu)象變化的催化活性與該類酶對天然全長蛋白構(gòu)象的調(diào)控活性結(jié)合起來，證明了mBiP N端ATPase結(jié)構(gòu)域上第117位脯氨

3、酸為mFKBP23 N端PPIase活性的底物位點(diǎn)。這一結(jié)論揭示了FKBP23作為具有結(jié)合ca+能力的分子伴侶，在調(diào)節(jié)BiP的ATPase活性時發(fā)揮了分子扳機(jī)的作用。這一調(diào)控機(jī)制與所有常見的調(diào)控系統(tǒng)完全不同，為肽脯氨酰順反異構(gòu)酶充當(dāng)分子開關(guān)這一全新功能提供了新的認(rèn)識。此外，以克隆蛋白質(zhì)FKBP23與BiP的C端片段蛋白為研究對象，采用蛋白質(zhì)交聯(lián)、蛋白酶消化和RP-HPLC分離的方法，對含有兩種目標(biāo)蛋白C端結(jié)構(gòu)域結(jié)合位點(diǎn)序列的短肽進(jìn)行了分