CoREST SANT結(jié)構(gòu)域蛋白與非編碼小dsRNA相互作用模式的初步研究.pdf

1、分類號(hào) 密級(jí)華 中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文C OR E STSA N T 結(jié)構(gòu)域蛋 白與非編碼小 d s R N A 相互作用模式的初步研究I ni t i alst o 勿 ofi ntera c t i onm eehan i smofC oR E STSA N Tdom ai nan dn o n 一 eo d in gsm alld sR N A研 究 生指 導(dǎo) 教 師指 導(dǎo) 小 組: 湛章舟: 伍 曉雄 副教授曹春陽(yáng) 研究員: 龍

2、 良啟 教授趙京楊 副教授戴漢川 副教授專 業(yè) : 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱 : 碩 士研究方 向: 動(dòng)物生理生化獲得學(xué)位 時(shí)間: 2009 年 6 月華 中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二 0 0 九年六月CoRESTSANT 結(jié)構(gòu)域蛋 白與非編碼小 dsRNA 相互作用模式 的初步研究2.4 質(zhì) 粒 的制備 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 5 連 接 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 6 重組質(zhì)粒 的小量表達(dá) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

5、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……192. 7N i 2+柱 的再生 …… ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . .

6、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……202 . 8 表 達(dá)和純化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

7、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……20第三 部 分 C oR E ST 蛋 白 SA N TI 結(jié)構(gòu) 域質(zhì)粒構(gòu)建 、表 達(dá)純化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……211 含 托 s· ta g

8、 的 pSJ3一 C oRE STSA N T I 的質(zhì)粒構(gòu)建一1.1 引物 設(shè)計(jì)1.2PC R 擴(kuò)增.................. ....... ...................……， 2 1. .. ... ... ... ..... ..... ... ... .... .... .... .. ...…… 2 11. 3 重 組質(zhì) 粒 的菌液 PC R 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . .

9、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……221. 4 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

10、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……2222 勺 白勺 石 2 重 組 psJ3一 c oRE sTsAN TI 表達(dá)條件 的優(yōu)化2. 1 重組質(zhì)粒 pSJ3SAN TI 小量表 達(dá)條件 的優(yōu)化22 分析

11、， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……2

12、5產(chǎn) O ︸ 6 2 2 3 含 SIJ M o.ta g 和 FL A G.ta g 的 pSM T 3一 C oRE ST-FLA GSA N TI 的質(zhì)粒 構(gòu)建 . ……護(hù) 6 23. 1 引物 設(shè)計(jì)3. 2P C R 擴(kuò)增3. 3 重 組質(zhì)粒 的菌液 PC R 鑒 定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … ‘ . . . . . . . . . . . . . . . .

13、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……273. 4 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

14、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……274 含 SU M o.ta g 和 FL A G.ta g 的 pSM T 3一 C oRE ST-FL A GSA N TI 蛋 白表達(dá)條件 的優(yōu)化 . . . . . … … ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……274. 1 重組質(zhì)粒 pSM T 3一 SA N TI 一 F L A

16、 G 小量表達(dá) 的優(yōu)化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……274.2 分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……305 含 GB 卜 ta g 的 pH G B 一 C oRE STSA N TI 的質(zhì)粒構(gòu)建. . . . . . . . . . . … …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

18、. ……305.1 引物 設(shè)計(jì) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、. . . ……305. 2P C R 擴(kuò)增 . … ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

20、 . . . . ……315. 3 目標(biāo) 質(zhì)粒 的菌液 PC R 鑒定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … ， . . . . ……315. 4 分 析 . . . . . . . . . . . . . . .

21、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……犯6G B I.t agc oRE sT SAN TI 融合

22、蛋 白表達(dá)條件 的優(yōu)化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……犯6.1 重組質(zhì)粒 pH GBSA N TI 小量表達(dá)條件 的優(yōu)化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……326.2 分析

23、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .