2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩109頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、動脈粥樣硬化是一種血管壁的慢性疾病,主要癥狀為大中動脈內(nèi)膜下脂質(zhì)沉積,內(nèi)膜增厚,形成粥樣斑塊。動脈粥樣硬化是中風(fēng)、心肌梗死、缺血性心力衰竭和其他心臟病的主要原因,在西方國家,50%的死亡根本原因?yàn)閯用}粥樣硬化。在動脈粥樣硬化發(fā)病過程中,血管平滑肌細(xì)胞的作用至關(guān)重要,它的異常增殖、遷移和分化導(dǎo)致了血管的病理學(xué)變化。內(nèi)膜增厚也是動脈粥樣硬化發(fā)展中的一項(xiàng)典型病理特征。miRNA在基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,它能夠與靶基因mRNA的3'

2、UTR區(qū)堿基互補(bǔ),引導(dǎo)沉默復(fù)合物降解靶標(biāo)分子或者抑制mRNA的翻譯。在過去十年的研究中表明,miRNA在各種心血管疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮調(diào)控作用。也有一些研究表明,動脈粥樣硬化的發(fā)生與miRNA的異常表達(dá)高度相關(guān)。曾經(jīng)有報(bào)道m(xù)iR-17-5p可以用來作為診斷冠狀動脈粥樣硬化的分子標(biāo)記,具有很高的特異性和靈敏度。但是miR-17-5p在動脈粥樣硬化發(fā)展中的具體作用和機(jī)制還不清楚,因此,本研究通過臨床樣本檢測、動物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn),初步探討miR-

3、17-5p在動脈粥樣硬化發(fā)展中的作用和機(jī)制。
  極低密度脂蛋白受體(VLDLR)屬于LDLR超家族的成員之一,是主要在心臟、肌肉、脂肪細(xì)胞和腦中表達(dá)的外周脂蛋白受體。它能夠與含有載脂蛋白E的脂蛋白結(jié)合,如極低密度脂蛋白、乳糜微粒、中間密度脂蛋白等。在LDLR缺陷型小鼠中用腺病毒介導(dǎo)的肝臟中VLDLR過表達(dá),顯示出VLDLR在預(yù)防動脈粥樣硬化病變形成以及脂肪條紋病變的潛力。目前認(rèn)為,VLDLR也是動脈粥樣硬化表達(dá)中重要的調(diào)控因子。

4、本研究發(fā)現(xiàn),VLDLR可能是miR-17-5p的潛在靶分子,基于此預(yù)測,本研究提出了一條基于新的miRNA調(diào)控通路的科學(xué)假設(shè)并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,具有十分重要的理論和應(yīng)用價(jià)值,有利于探索新的藥物靶點(diǎn),將會為動脈粥樣硬化的診斷和治療提供新的方向。以下為本研究各部分內(nèi)容的概述:
  第一部分動脈粥樣硬化患者中miR-17-5p與VLDLR的表達(dá)相關(guān)性
  目的:明確動脈粥樣硬化發(fā)病與miR-17-5p、VLDLR的相關(guān)性。
  

5、方法:以30對來源于動脈粥樣患者和健康人群的外周血樣本為研究材料,通過Real-time PCR檢測各樣本中miR-17-5p和VLDLR mRNA表達(dá)量,對比miR-17-5p及VLDLR在動脈粥樣硬化組和健康對照組之間的表達(dá)差異。
  結(jié)果:Real-time PCR檢測miR-17-5p表達(dá)結(jié)果顯示,動脈粥樣硬化患者外周血中的miR-17-5p的表達(dá)量顯著高于對照組(P<0.01)。Real-time PCR檢測VLDLR的

6、結(jié)果顯示,VLDLR mRNA表達(dá)水平顯著低于對照組(P<0.01)。
  結(jié)論:(1)動脈粥樣硬化發(fā)病與外周血中miR-17-5p的表達(dá)水平呈正相關(guān)。(2)動脈粥樣硬化發(fā)病與外周血中VLDLR的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。
  第二部分動脈粥樣硬化小鼠中miR-17-5p對動脈粥樣硬化的影響
  目的:探討miR-17-5p對動脈粥樣硬化小鼠的影響,初步闡述其作用機(jī)制;評估m(xù)iR-17-5p作為治療動脈粥樣硬化靶位點(diǎn)的應(yīng)用價(jià)值

7、。
  方法:用高脂飼養(yǎng)ApoE-/-小鼠12周構(gòu)建動脈粥樣硬化小鼠模型,注射antagomiR-17-5p及NC miRNA干擾小鼠體內(nèi)的miR-17-5p的表達(dá)。通過HE染色檢測各組小鼠動脈血管的病理變化,測量各組小鼠血管內(nèi)膜、中膜面積,計(jì)算內(nèi)膜/中膜面積比(I/M),測量管腔面積,探討干擾miR-17-5p對動脈粥樣硬化的治療作用。通過免疫熒光、Real-time PCR、Western blot檢測各組小鼠動脈組織中VLD

8、LR的表達(dá),Real-time PCR、Western blot檢測PCSK9的表達(dá),Western blot檢測Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白的表達(dá), ELISA檢測血管炎癥因子(TNF-α、IL-6,IL-10)水平,試劑盒法檢測MDA、SOD及髓過氧化物酶(MPO)水平及活性,進(jìn)一步探討miR-17-5p作用的分子機(jī)制。
  結(jié)果:HE染色結(jié)果顯示AS小鼠與對照組相比,其

9、血管內(nèi)皮形成了明顯的斑塊,平滑肌細(xì)胞排列紊亂,內(nèi)膜增生,而antagomiR-17-5p處理的小鼠與NC miRNA組相比,病變程度明顯減輕。動脈粥樣硬化小鼠比對照小鼠的內(nèi)膜面積明顯增加,抑制miR-17-5p的作用之后,內(nèi)膜面積減少;各組小鼠中中膜面積差異不顯著。計(jì)算I/M值,antagomiR-17-5p組小鼠比NC-miRNA組顯著減小(P<0.05)。AS模型組和NC-miRNA組小鼠的血管管腔面積比對照組明顯減小,而antag

10、omiR-17-5p組則緩解了這種作用,結(jié)果差異具有顯著性(P<0.05)。免疫熒光、Real-time PCR、Western blot檢測各組小鼠動脈組織中VLDLR的表達(dá),結(jié)果顯示動脈粥樣硬化小鼠中VLDLR的表達(dá)量顯著下降,抑制miR-17-5p的作用使得VLDLR水平上升。通過Real-time PCR和Western blot檢測PCSK9在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)變化,結(jié)果與VLDLR相反,在AS模型組中PCSK9在mR

11、NA和蛋白水平上的表達(dá)量均顯著上調(diào),在antagomiR-17-5p組中表達(dá)量顯著下調(diào)。Western blot檢測結(jié)果顯示,動脈粥樣硬化小鼠中Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-PARP表達(dá)水平上調(diào),Bcl-2水平降低,抑制miR-17-5p的作用使Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-PARP表達(dá)水平降低,Bcl-2水平上調(diào);ELISA檢測結(jié)果顯示,AS模型小鼠TNF-α、IL-6水平升

12、高,IL-10水平降低,抑制miR-17-5p的作用后則TNF-α、IL-6水平降低,IL-10水平上調(diào);細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測結(jié)果表明,AS模型小鼠MDA、MPO水平上調(diào),SOD活性降低,抑制miR-17-5p的作用能夠抑制MDA、MPO水平及活性,上調(diào)SOD酶活性。
  結(jié)論:(1)抑制miR-17-5p對小鼠中的動脈硬化具有顯著的治療作用,能夠有效緩解動脈粥樣硬化小鼠動脈血管的病理變化,減少斑塊的形成,緩解AS造成的內(nèi)膜增生和

13、管腔狹窄。(2)干擾miR-17-5p的表達(dá)量上調(diào)動脈組織中VLDLR的表達(dá)量。(3)干擾miR-17-5p的表達(dá)量下調(diào)動脈組織中PCSK9的表達(dá)。(4)干擾miR-17-5p的表達(dá)量抑制動脈組織中細(xì)胞凋亡。(5)干擾miR-17-5p的表達(dá)量抑制動脈組織中炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激。
  第三部分 miR-17-5p直接調(diào)控平滑肌細(xì)胞中VLDLR的表達(dá)
  目的:探討miR-17-5p在血管平滑肌細(xì)胞中靶向VLDLR調(diào)控其表達(dá)的機(jī)

14、制;
  方法:利用TargetScan對miR-17-5p和VLDLR之間的靶向調(diào)控關(guān)系進(jìn)行了預(yù)測;體外培養(yǎng)人的血管平滑肌細(xì)胞,通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-17-5p對VLDLR的直接調(diào)控作用。在血管平滑肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-17-5p inhibitor及其對照,然后通過Real-time PCR和Western blot檢測VLDLR的表達(dá)量。構(gòu)建PCSK9重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染血管平滑肌細(xì)胞,然后通過Real-time PCR和W

15、estern blot檢測VLDLR的表達(dá)量變化。
  結(jié)果:TargetScan在線網(wǎng)站對miR-17-5p與VLDLR之間相互作用的預(yù)測結(jié)果顯示VLDLR可能是miR-17-5p的潛在靶位點(diǎn)。在血管平滑肌細(xì)胞中進(jìn)行的雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VLDLR3'UTR與miR-17-5p共轉(zhuǎn)染導(dǎo)致熒光素酶活性顯著下降,表明miR-17-5p能夠直接結(jié)合VLDLR3'UTR區(qū),抑制VLDLR的表達(dá)。對VLDLR的Real-time PCR

16、和Western blot的檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-17-5p inhibitor之后,VLDLR的表達(dá)量明顯上升(P<0.01)。Real-time PCR和Western blot的檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染PCSK9之后,VLDLR的表達(dá)量明顯降低(P<0.01)
  結(jié)論:(1) miR-17-5p直接靶向VLDLR mRNA的3'UTR區(qū),下調(diào)VLDLR的表達(dá)。(2)抑制血管平滑肌細(xì)胞中miR-17-5p的表達(dá),可以提高VLDLR

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論