光子晶體在ITP患者血小板膜糖蛋白特異性抗體多元分析中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分光子晶體水凝膠微球的制備及工作條件優(yōu)化
　　背景：多元分析技術(shù)在生物科學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，在基因序列和蛋白質(zhì)功能分析方面已取得了相當(dāng)?shù)某删?。其中基于流?dòng)編碼載體的液相芯片技術(shù)具有高通量，使用靈活，靈敏度高，重復(fù)性好的特點(diǎn)，是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。東南大學(xué)國(guó)家生物電子重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室已將該技術(shù)應(yīng)用于多種癌癥標(biāo)志物的并行檢測(cè)，取了一定成就同時(shí)仍存在部分問題。本論文依據(jù)已成熟的技術(shù)進(jìn)行基于光子晶體微陣列的多元檢測(cè)平臺(tái)的優(yōu)化，并解決檢測(cè)中

2、存在的問題。
　　方法：探索和優(yōu)化制備高質(zhì)量光子晶體水凝膠微球的條件，并在優(yōu)化條件下生產(chǎn)出了四種光子晶體編碼膠體晶體微球。選取人IgG作為待檢靶蛋白,在瓊脂糖水凝膠上首先固定羊抗人IgG抗體,經(jīng)過(guò)洗滌、封閉后，依次加入標(biāo)準(zhǔn)抗原、熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體,分別孵育、洗滌后,倒置熒光顯微鏡獲取圖像及熒光強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng)度優(yōu)化最佳瓊脂糖水凝膠濃度、固定時(shí)間、氫氧化鈉濃度、環(huán)氧氯丙烷濃度以及抗體濃度。
　　結(jié)果：在水凝膠濃度4％、NaOH

3、濃度1.0mol/L、環(huán)氧氯丙烷濃度10%、反應(yīng)時(shí)間3h、抗體濃度0.01mg/ml的條件下,熒光強(qiáng)度達(dá)到最強(qiáng)，即抗體修飾密度達(dá)到最大。
　　結(jié)論：本研究?jī)?yōu)化了以瓊脂糖水凝膠包裹的光子晶體為載體的抗體修飾反應(yīng)條件,提高了光子晶體微陣列檢測(cè)平臺(tái)的靈敏度。
　　第二部分構(gòu)建光子晶體微陣列進(jìn)行血小板特異性抗體多元分析
　　背景：血小板膜糖蛋白特異性抗體是由于機(jī)體免疫系統(tǒng)功能紊亂而產(chǎn)生的針對(duì)血小板膜糖蛋白的抗體，是引起病人血小

4、板減少及巨核細(xì)胞成熟障礙的重要原因，可導(dǎo)致多種臨床病癥，如原發(fā)免疫性血小板減少癥，輸血后紫癜，血小板輸注無(wú)效，移植后排斥反應(yīng)及輸血后急性呼吸窘迫等等。血小板減少的臨床表現(xiàn)為廣泛皮膚、黏膜或內(nèi)臟出血。現(xiàn)階段診斷主要依靠病史、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查和對(duì)其它原因的排除。
　　方法：根據(jù)光子晶體水凝膠微球的光學(xué)特性，抗原-抗體的結(jié)合反應(yīng)原理，在此基礎(chǔ)上提出應(yīng)用光子晶體微球微陣列多元檢測(cè)血清中血小板特異性抗體的方案，并應(yīng)用單克隆抗體俘獲特異性

5、抗原法做為對(duì)照方法。初步構(gòu)建敏感性高、特異性強(qiáng)、快速的多元檢測(cè)血小板特異性抗體的光子晶體微陣列檢測(cè)平臺(tái)。
　　結(jié)果：應(yīng)用包被單克隆抗體的懸浮微陣列進(jìn)行多元分析，檢測(cè)抗GPIIb/IIIa抗體的敏感性高于單克隆抗體俘獲特異性抗原（MAIPA組）（P<0.05）；檢測(cè)抗 GPIb/IV抗體的敏感性與MAIPA相當(dāng)（P>0.05）；多元分析的特異性與MAIPA相當(dāng)（P>0.05）。多元分析的多種單克隆抗體間不存在交叉反應(yīng)。包被血小板膜糖