FBXW7通過調(diào)控FetuinA蛋白水平改善胰島素抵抗的機制研究.pdf

1、目的:FBXW7屬于SCF類泛素連接酶E3，可調(diào)控脂質(zhì)代謝關鍵轉(zhuǎn)錄因子和胰島功能相關蛋白的泛素化降解。FetuinA是一類參與機體糖脂代謝調(diào)控的重要肝臟因子，與胰島素抵抗發(fā)生密切相關，但在肥胖狀態(tài)下肝臟中蛋白水平異常升高機制不得而知。本研究擬探究FBXW7在肥胖狀態(tài)下對FetuinA蛋白水平調(diào)節(jié)機制，有助于進一步完善肥胖致胰島素抵抗機制。
　　方法:本課題結合高脂飲食誘導的HFD肥胖小鼠模型和正常飲食誘導的ob/ob小鼠肥胖模型，

2、檢測小鼠糖脂代謝相關指標，采用Real-time PCR和ELISA、western blot方法檢測小鼠肝臟FBXW7、FetuinA的mRNA水平和蛋白水平;在ob/ob小鼠和HFD小鼠肝臟中，過表達FBXW7，然后檢測小鼠糖脂代謝相關指標變化，檢測FBXW7、FetuinA的mRNA和蛋白水平變化。在HEK293T細胞和HepG2細胞中過表達FetuinA，給以CHX刺激，檢測FetuinA的蛋白水平變化;在HEK293T細胞中外

3、轉(zhuǎn)入FBXW7、FetuinA和泛素分子，通過免疫共沉淀實驗檢測FBXW7、FetuinA和泛素分子間是否發(fā)生相互作用。
　　結果:FBXW7在肥胖相關小鼠模型中蛋白水平下降;FBXW7在肥胖小鼠模型中過表達有助于機體糖脂代謝改善;FetuinA在肥胖小鼠肝臟中蛋白水平顯著升高但mRNA水平不具有穩(wěn)定趨勢變化;通過進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BXW7作用于FetuinA的泛素化蛋白酶體途徑降解且FFA能夠阻礙FetuinA的降解效率。