Neu-p11通過上調(diào)ATGL-HSL表達(dá)改善胰島素抵抗.pdf

1、研究背景與目的：
　　以色列Neurim Pharmaceuticals Ltd.新近研發(fā)的Neu-p11，不僅是褪黑素（Melatonin，Mel）非選擇性受體激動(dòng)劑，而且具有與Mel類似的結(jié)構(gòu)、相近的生物學(xué)功能，兩者均可顯著抑制高糖高脂喂食大鼠體重的增加，減少脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（triglyceride，TG）蓄積，改善胰島素抵抗（insulin resistance，IR）。脂肪細(xì)胞內(nèi)TG含量增高與肥胖、胰島素抵抗密切相關(guān)。

2、作為經(jīng)典脂肪分解酶的激素敏感脂肪酶（Hormone sensitive lipase，HSL）以及新近發(fā)現(xiàn)的脂肪組織甘油三酯酶(Adipose triglyceride lipase，ATGL)均是脂肪動(dòng)員的關(guān)鍵酶，在脂肪組織TG分解代謝中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，且在鼠白色脂肪組織（white adipose tissue，WAT）促使TG水解的酶中，95％以上均為ATGL與HSL發(fā)揮作用效應(yīng)。另有實(shí)驗(yàn)證實(shí)：與胰島素敏感組相比，具有胰島素抗

3、性的細(xì)胞內(nèi)ATGL與HSL的蛋白及mRNA水平均降低。本課題旨在觀察Neu-p11干預(yù)前后，高糖高胰島素（high glucose and insulin，HGI）誘導(dǎo)的3T3-L1胰島素抵抗脂肪細(xì)胞中ATGL、HSL蛋白表達(dá)的變化，對(duì)脂肪細(xì)胞內(nèi)TG含量的影響及兩者的相關(guān)性，同時(shí)對(duì)產(chǎn)生上述效應(yīng)的相關(guān)機(jī)制做深層次的探討。
　　方法：
　　（1）3T3-L1脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)、分化：經(jīng)典的“雞尾酒”法（0.5mM IBMX，1μM

4、DEX，10μg/ml INS）誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，油紅O染色法鑒定脂肪細(xì)胞形態(tài)及3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化程度。（2）胰島素抵抗模型的制備：高糖高胰島素孵育脂肪細(xì)胞24小時(shí)，葡萄糖氧化酶法間接檢測(cè)糖消耗量驗(yàn)證胰島素抵抗細(xì)胞模型構(gòu)建是否成功。（3）甘油三酯酶法及葡萄糖氧化酶——過氧化物酶法分別檢測(cè)在 Luzindole存在與否的前提下，Neu-p11干預(yù)前后各組脂肪細(xì)胞中甘油三酯沉積量及培養(yǎng)基內(nèi)葡

5、萄糖含量。（4）Western Blot檢測(cè)高糖高胰島素作用前后脂肪細(xì)胞ATGL、HSL蛋白的表達(dá)變化及Neu-p11干預(yù)（Luzindole作用與否）對(duì)上述蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)“雞尾酒”法誘導(dǎo)10天后，通過油紅O染色可見90%以上細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的“戒環(huán)樣”結(jié)構(gòu)：細(xì)胞呈圓形，內(nèi)含大量脂滴，且呈環(huán)形排列，即表明已分化為典型的成熟脂肪細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：高糖高胰島素聯(lián)合作用3T3-L1脂肪細(xì)胞

6、24h，明顯降低細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗量，成功誘導(dǎo)其發(fā)生胰島素抵抗。另外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明：與Con組相比，HGI處理脂肪細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)積聚，TG含量明顯增高，細(xì)胞內(nèi)ATGL、HSL蛋白表達(dá)下調(diào)；經(jīng)Neu-p11干預(yù)，與Mel具有類似效應(yīng)，可以明顯促進(jìn)胰島素抵抗脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚，降低細(xì)胞內(nèi)TG含量，上調(diào)ATGL及HSL蛋白表達(dá)，但并不影響3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)TG水平；MT2競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑Luzindole（LZD）