CGRP通過cAMP-PPARγ-eNOS途徑改善血管內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗.pdf

1、背景與目的:血管功能異常是糖尿病的主要并發(fā)癥，其中，內(nèi)皮細(xì)胞損傷或?qū)ζ咸烟堑睦谜系K是血管功能重構(gòu)的重要環(huán)節(jié)，本研究通過建立內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗模型，探討感覺神經(jīng)末梢釋放的強舒血管活性肽—降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗模型中的保護作用及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。
　　方法:以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）作為對象。光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；用33.3mmol/L高糖和不同濃度的胰島素處理內(nèi)皮細(xì)胞24h和48h，通過檢

2、測培養(yǎng)中上清液中的葡萄糖消耗量和細(xì)胞糖原合成量，及細(xì)胞 eNOS的表達(dá)，確定內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗模型成功建立；用10nmol/L CGRP處理內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗模型24h，分別用葡萄糖氧化酶法和蒽酮-硫酸法檢測內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗模型中的葡萄糖消耗能力和糖原合成能力；Western blot檢測PPARγ和eNOS的蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測PPARγ和eNOS的基因表達(dá)；為了檢測CGRP是否通過cAMP上調(diào)PPARγ和eNOS蛋白的表達(dá)，

3、使用AC阻斷劑SQ22536檢測下游蛋白PPARγ和eNOS蛋白基因表達(dá)變化。
　　結(jié)果：33.3mmol/L的高糖和5μmol/L的胰島素處理24h可以成功誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生胰島抵抗。相比正常組內(nèi)皮細(xì)胞，胰島素抵抗（IR）模型組細(xì)胞體積變大，邊界模糊，形態(tài)異常；當(dāng)細(xì)胞用高糖和高胰島素分別誘導(dǎo)24h和48h時細(xì)胞葡萄糖消耗量分別減少20％和31%，并且糖原合成分別減少了55%和64%，差異都具有顯著性（P<0.01），PPARγ和e

4、NOS的表達(dá)都降低（P<0.05）。10nmol/L CGRP可以明顯增加內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗模型中葡萄糖的消耗量約為20%和糖原合成增加約為70%，與非處理IR模型組相比具有顯著性差異（P<0.01）；同時，與IR模型組相比，10nmol/L CGRP能增加PPARγ和eNOS蛋白和mRNA表達(dá)并具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；當(dāng)使用SQ22536阻斷cAMP下游蛋白PPARγ和eNOS的蛋白和基因表達(dá)量明顯減少。與IR的CGRP處理組