左氧氟沙星涂敷導(dǎo)管預(yù)防銅綠假單胞菌導(dǎo)管相關(guān)感染的體內(nèi)外研究.pdf

1、第一部分體外研究
　　 目的：制備不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管。評估LFX涂敷導(dǎo)管的特點(diǎn)，體外觀察LFX涂敷導(dǎo)管抑制P.a粘附、定植的能力，探討LFX涂敷導(dǎo)管在P.a導(dǎo)管相關(guān)感染中的作用
　　 方法：(1)按LFX與PDLLA的比值(w/w)，溶劑法將二者混合溶解在丙酮中，PVC導(dǎo)管置入上述混合液，30分鐘取出，室溫下晾干，即制成不同載藥量的LFX1∶3、LFX1∶6、LFX1∶9涂敷導(dǎo)管；同樣方法，制成不含LFX的PDL

2、LA涂敷導(dǎo)管。(2)繪制LFX標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管的體外藥物釋放，計算不同時間的藥物累積釋放度及藥物累積釋放濃度。(3)測定LFX對PAO1的MIC和MBC。(4)分LFX1∶3、LFX1∶6、LFX1∶9涂敷導(dǎo)管組、PVC導(dǎo)管組和PDLLA涂敷導(dǎo)管組，各組導(dǎo)管浸沒在5ml50％LB培養(yǎng)液中(含PAO1109CFU/ml)，37℃孵育6、12、24、48h，在各時間點(diǎn)，予導(dǎo)管表面和導(dǎo)管培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)菌計數(shù)。同時測定LF

3、X對不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管培養(yǎng)液細(xì)菌的MIC和MBC。
　　 結(jié)果：(1)藥物釋放測定，LFX1∶3、LFX1∶6、LFX1∶9涂敷導(dǎo)管均顯示LFX的快速釋放。24h后三種涂敷導(dǎo)管藥物釋放很少甚至沒有釋放。三種不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管在各時間點(diǎn)的藥物累積釋放濃度均顯著大于LFX對PAO1的MBC。(2)LFX對PAO1的MIC和MBC分別為0.5ug/ml、1.0ug/ml。(3)在6、12、24h孵育時間點(diǎn)，LFX1∶3

4、、LFX1∶6、LFX1∶9涂敷導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陰性；對照組PVC導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陽性，細(xì)菌中位數(shù)分別為5.88log10CFU，6.14log10CFU，6.34log10CFU(P=0.014，P=0.014，P=0.014)。孵育48h時，LFX1∶3涂敷導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陰性，LFX1∶6和LFX1∶9涂敷導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陽性，細(xì)菌中位數(shù)分別為2.66log10CFU和2.82log10CFU，而PVC導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陽性，細(xì)菌中

5、位數(shù)為6.11log10CFU(P=0.014，P=0.021，P=0.021)。另外，各孵育時間點(diǎn)，PVC導(dǎo)管和PDLLA涂敷導(dǎo)管表面的細(xì)菌計數(shù)相似(P＞0.05)。(4)在6、12、24、48h孵育時間點(diǎn)，LFX1∶3、LFX1∶6、LFX1∶9涂敷導(dǎo)管培養(yǎng)液的細(xì)菌數(shù)較PVC導(dǎo)管均明顯減少(P＜0.05)。各組LFX涂敷導(dǎo)管的48h培養(yǎng)液的細(xì)菌數(shù)與6h培養(yǎng)液的細(xì)菌數(shù)沒有明顯增多(P=0.166，P=0.182，P=0.190)；與之

6、相比，PVC導(dǎo)管培養(yǎng)液的細(xì)菌數(shù)日漸增多(P=0.02)。另外，各孵育時間點(diǎn)，PVC導(dǎo)管和PDLLA涂敷導(dǎo)管培養(yǎng)液的細(xì)菌數(shù)相似(P＞0.05)。(5)LFX對不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管在孵育6、12、24、48h時培養(yǎng)液細(xì)菌的MIC均為0.5ug/ml、MBC均為1.0ug/ml。
　　 結(jié)論：LFX1∶3、LFX1∶6、LFX1∶9涂敷導(dǎo)管均具有藥物快速釋放特點(diǎn)，涂敷導(dǎo)管隨LFX含量增加，藥物L(fēng)FX釋放增加。三種不同載藥量的LF

7、X涂敷導(dǎo)管均能有效抑制P.a粘附、定植，并能殺滅導(dǎo)管周圍介質(zhì)的Pa，抑制Pa生長，其中載藥含量最多，釋放藥量也是最多的LFX1∶3涂敷導(dǎo)管防止細(xì)菌粘附能力最強(qiáng)。提示LFX涂敷導(dǎo)管能有效預(yù)防P.a導(dǎo)管相關(guān)感染。另外，三種不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管2h時的藥物釋放濃度均大于LFX對PAO1的MBC，而且LFX對不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管在不同孵育時間點(diǎn)培養(yǎng)液細(xì)菌的MBC與LFX對孵育前細(xì)菌的MBC相同，暗示不同載藥量的LFX涂敷導(dǎo)管耐藥風(fēng)險

8、小.
　　 第二部分體內(nèi)研究
　　 目的：模擬臨床導(dǎo)管相關(guān)感染的典型特征，建立小鼠“組織籠”感染模型，觀察LFX1∶3涂敷導(dǎo)管抑制Pa粘附，防止BF形成的能力，評估LFX1∶3涂敷導(dǎo)管在體內(nèi)預(yù)防P.a導(dǎo)管相關(guān)感染中的作用。
　　 方法：小鼠皮下植入LFX1∶3涂敷導(dǎo)管和PVC導(dǎo)管，沿著植入導(dǎo)管注射PAO1菌液50ul(107CFU)。感染第1、5天，宰殺小鼠，收集標(biāo)本，對植入導(dǎo)管及導(dǎo)管周圍組織進(jìn)行細(xì)菌計數(shù)。SEM

9、觀察植入導(dǎo)管表面細(xì)菌的粘附及生物膜形成情況。
　　 結(jié)果：(1)P.a感染第1天，LFX1∶3涂敷導(dǎo)管組8根植入導(dǎo)管有3根細(xì)菌培養(yǎng)陽性，而PVC對照組8根植入導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陽性，細(xì)菌中位數(shù)為4.11log10CFU(P=0.001)。第5天，LFX1∶3涂敷導(dǎo)管組8根植入導(dǎo)管全部細(xì)菌培養(yǎng)陰性；與之相比，PVC對照組植入導(dǎo)管表面粘附的細(xì)菌仍居高不下，細(xì)菌中位數(shù)為4.99log10CFU(P=0.000)。(2)P.a感染第1、5

10、天，LFX1∶3涂敷導(dǎo)管組和PVC對照組的植入導(dǎo)管周圍組織細(xì)菌培養(yǎng)均陽性，細(xì)菌中位數(shù)分別3.96log10CFU，44log10CFU(P=0.001)；4.33log10CFU，5.42log10CFU(P=0.001)。與PVC植入導(dǎo)管相比，LFX1∶3涂敷植入導(dǎo)管能明顯減少植入導(dǎo)管周圍組織的細(xì)菌量。(3)SEM觀察：P.a感染第1天，LFX1∶3涂敷植入導(dǎo)管表面見散在單個細(xì)菌或者沒有細(xì)菌，而PVC植入導(dǎo)管表面大量細(xì)菌分散存在，密集

11、分布，還可見一些細(xì)菌聚集成的微菌落，但不聚集成堆。第5天，LFX1∶3涂敷植入導(dǎo)管表面未見細(xì)菌粘附，PVC植入導(dǎo)管表面細(xì)菌粘附濃密，并聚集成堆，成簇，周圍有凹凸不平的濃厚粘液狀物質(zhì)緊密包繞，“珊瑚狀”BF形成，其中可見散在多型核白細(xì)胞。(4)肉眼觀察：P.a感染第1天，LFX1∶3涂敷植入導(dǎo)管和PVC植入導(dǎo)管內(nèi)均有分泌物存在，植入導(dǎo)管周圍組織輕度充血、水腫。第5天，LFX1∶3涂敷植入導(dǎo)管內(nèi)分泌物極少，導(dǎo)管周圍組織沒有炎癥或膿腫形成；而