耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌整合子相關(guān)研究.pdf

1、背景與目的：過去幾十年中，隨著抗生素在臨床的廣泛使用，耐藥菌株不斷產(chǎn)生。銅綠假單胞菌是引起院內(nèi)感染的一種重要細(xì)菌，但由于多重耐藥株尤其是耐碳青霉烯類分離株的不斷出現(xiàn)，給臨床治療帶來很大困難。研究發(fā)現(xiàn)，從外界獲得耐藥基因是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的重要機(jī)制之一。整合子是近年新發(fā)現(xiàn)的一種移動性基因元件，它存在于細(xì)菌的基因組或質(zhì)粒上，通過位點(diǎn)特異性重組的方式捕獲外界基因（包括耐藥基因）并使其表達(dá)，且細(xì)菌的耐藥性可隨著整合子的轉(zhuǎn)移在細(xì)菌中傳播。此外，一個

2、整合子可攜帶多種耐藥基因，從而使宿主菌表現(xiàn)為多重耐藥。由于整合子在細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生和傳播方面的重要性，目前已引起了研究者們的重視。在本研究中，我們將關(guān)注耐碳青霉烯銅綠假單胞菌中整合子的分布、攜帶耐藥基因的情況以及啟動子的類型，并對整合子陽性菌株的同源性進(jìn)行分析，以期闡明此種多重耐藥菌的來源。
　　方法：
　　（1）用WHONET5.6軟件，對2012年1月至2014年12月李惠利醫(yī)院臨床分離的1130株銅綠假單胞菌的各項數(shù)據(jù)進(jìn)

3、行回顧性分析，以了解我院銅綠假單胞菌的臨床分布及耐藥性情況。
　?。?）用 PCR技術(shù)對臨床分離的336株耐碳青霉烯類藥物的銅綠假單胞菌進(jìn)行第1類和第2類整合子進(jìn)行篩查，以了解整合子在實(shí)驗(yàn)菌株中的分布情況。
　?。?）對整合子陽性菌株的可變區(qū)、可變區(qū)啟動子 PC和P2分別擴(kuò)增后測序，明確可變區(qū)基因和啟動子的種類及排列方式，并分析其與實(shí)驗(yàn)菌株的耐藥性之間的關(guān)系。
　?。?）采用腸桿菌科基因組間重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)（ERI

4、C-PCR）的方法，對整合子陽性菌株進(jìn)行同源性分析，以探討其來源。
　　結(jié)果：
　?。?）1130株銅綠假單胞菌主要分離自呼吸道標(biāo)本，以重癥監(jiān)護(hù)室（ICU）、神經(jīng)外科和呼吸科居多，其對頭孢菌素類抗生素的耐藥率均在90％以上，對喹諾酮類和碳青霉烯類的耐藥率也達(dá)到25.3%和30.7%，且呈逐年上升趨勢；耐碳青霉烯銅綠假單胞菌共336株，它們對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢他啶等的耐藥率均顯著高于碳青霉烯類敏感組。
　?。?）

5、336株耐碳青霉烯銅綠假單胞菌中，第1類整合子陽性菌株共有42株，陽性率為12.5%，沒有篩選到第2類整合子；2012年至2014年第1類整合子陽性菌株檢出率數(shù)值分別為9.2%、12.6%、16.2%，呈逐年上升趨勢，攜帶整合子菌株對多種抗菌藥物的耐藥率均顯著高于整合子陰性菌株。
　　（3）在針對42株整合子陽性菌株可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增后發(fā)現(xiàn)，33株有擴(kuò)增產(chǎn)物，9株無擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物大小約為1.5kb或3kb，產(chǎn)物經(jīng)測序分析后顯

6、示為 aadA6△-orfd和aadA6△-ISPa21- aadA6△-orfd基因盒，其主要介導(dǎo)氨基糖苷類抗生素的耐藥。經(jīng)分析，以上耐藥基因盒的存在與細(xì)菌的相應(yīng)耐藥表型具有高度相關(guān)性。
　?。?）對42株第1類整合子陽性菌株的可變區(qū)啟動子Pc的擴(kuò)增和分析結(jié)果顯示：38例（90.4%）為PcH1（雜合1型啟動子），PcW（弱啟動子）2例，PcS（強(qiáng)啟動子）2例；未檢出有活性的P2啟動子。
　　（5）對42株整合子陽性菌株進(jìn)

7、行 ERIC-PCR基因分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有 A、B、C、D、E共5型，其中A型38株（A1型32株，A2型6株），占90.4%；B、C、D、E型各有1株；A基因型主要來自ICU和神經(jīng)外科。
　　結(jié)論：本地區(qū)分離的銅綠假單胞菌多重耐藥率較高，其中，耐碳青霉烯菌株的整合子攜帶率雖相對較低，但呈逐年增長的趨勢；其攜帶的整合子主要以第1類為主，可變區(qū)整合的耐藥基因主要介導(dǎo)對氨基糖苷類抗生素耐藥，基因型與菌株的耐藥表型呈高度相關(guān)；可變區(qū)啟動子