碳青霉烯類抗生素體外誘導(dǎo)銅綠假單胞菌耐藥的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的： 1．研究美羅培南及亞胺培南在體外對(duì)銅綠假單胞菌的耐藥誘導(dǎo)作用； 2．分析應(yīng)用泵抑制劑CCCP后對(duì)銅綠假單胞菌耐藥性的改變； 3．研究耐藥菌株與臨床分離敏感株外膜蛋白o(hù)prD2表達(dá)水平的差異； 4．測(cè)定銅綠假單胞菌耐藥基因決定區(qū)域。 方法： 1．用含藥瓊脂平板法，取臨床分離的對(duì)亞胺培南和美羅培南均敏感的銅綠假單胞菌15株，應(yīng)用不同濃度梯度亞胺培南和美羅培南逐級(jí)誘導(dǎo)，敏感株為對(duì)照組，篩

2、選耐藥菌； 2．在飽和濃度泵抑制劑作用下，測(cè)定銅綠假單胞菌對(duì)美羅培南及亞胺培南的最小抑菌濃度(MIC)值； 3．應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)、瓊脂糖電泳對(duì)oprD基因編碼區(qū)進(jìn)行研究，了解是否存在缺失突變； 4．膜蛋白電泳觀察誘導(dǎo)前后oprD2蛋白表達(dá)水平的差異； 5．細(xì)菌oprD基因編碼區(qū)測(cè)序分析，對(duì)耐藥菌的耐藥基因決定區(qū)域進(jìn)行研究； 6．采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS14.0的T Test比較外膜蛋白o(hù)prD2表達(dá)的

3、差異。 結(jié)果： 1．體外亞胺培南和美洛培南梯度誘導(dǎo)共產(chǎn)生30株高度耐藥菌株，MIC最低都達(dá)到256μg/ml(64×MIC)； 2．42％的耐藥菌株在應(yīng)用外排泵抑制后對(duì)抗菌藥物MIC下降； 3．在SDS-PAGE圖譜上亞胺培南與美洛培南耐藥組與同源敏感株相比均有外膜蛋白的減少； 4．測(cè)序結(jié)果顯示oprD基因編碼區(qū)存在點(diǎn)突變。 結(jié)論： 1．亞胺培南和美洛培南在體外以亞抑菌濃度誘導(dǎo)可產(chǎn)