RA患者外周血細胞亞群上Tim-3、Gal-9表達與炎癥和血管生成的相關性研究.pdf

1、研究目的：
　　類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以對稱性多關節(jié)炎為主要表現(xiàn)的慢性自身免疫性疾病，病理特征是關節(jié)滑膜炎伴血管翳形成，即滑膜血管生成。血管生成是指已有血管在原位以芽生或非芽生形式生成新的血管，包括血管基底膜的退化和血管內皮細胞周圍基質的增殖、轉移等復雜過程。RA滑膜血管生成、全身炎癥細胞活化與炎癥因子分泌相互作用，密不可分。
　　T細胞免疫球蛋白黏蛋白-3（T cell imm

2、unoglobulin domain and mucin-3，Tim-3）是一種負免疫調節(jié)因子，廣泛表達于多種細胞，并參與機體的免疫應答，它通過與多種配體的結合而發(fā)揮負性調控作用。半乳糖凝集素-9(Galectin-9，Gal-9)是Tim-3最重要的一個配體，二者關系密切，但是RA患者T亞群上Tim-3和Gal-9的研究目前報道不多。本研究旨在探討Tim-3、Gal-9在RA患者和健康對照者外周血中不同細胞亞群上表達的差異，分析其與R

3、A患者疾病活動度、炎癥因子和血管生成水平的相關關系。進一步明確Tim-3、Gal-9與炎癥反應、血管生成的相關性，即這兩個因子能否成為RA病情活動和血管生成的生物學標志物。
　　研究方法：
　　收集山東大學齊魯醫(yī)院風濕科門診和病房處于疾病活動期的RA患者共87例，組成類風濕關節(jié)炎患者組（RA組），所有入組的RA患者均符合1987年美國風濕病學會(ACR)類風濕關節(jié)炎分類標準。采用歐洲抗風濕病聯(lián)盟(EULAR)頒布的DAS28

4、評定患者的病情活動度，所有RA的DAS28均大于2.6。收集患者的性別、年齡、外周血白細胞計數(shù)(WBC)、血沉(ESR)、C反應蛋白(CRP)以及關節(jié)壓痛(T28)和腫脹數(shù)目(SW28)等臨床信息，并對每個患者做健康評估問卷(HAQ)調查，計算疾病活動指標DAS28、簡化的疾病活動性指數(shù)(SDAI)等。同時收集我院查體中心健康體檢者63例，組成健康對照組（HCs組）。
　　采用流式細胞術檢測所有受試者外周EDTA抗凝全血的三個T細

5、胞亞群即CD4+、CD8+、CD4-CD8-(Double negative T cell，DNT)占T細胞的百分比，調節(jié)性T細胞(Regulatory T cells，Treg)占CD4+T細胞的百分比及單核細胞(MC)占白細胞的百分比，測定各亞群上Tim-3、Gal-9、血管內皮生長因子(VEGF)和血管內皮生長因子受體1(VEGFR1)的表達水平。采用酶聯(lián)免疫吸附測定技術(ELISA)檢測血漿中TNG-α、IL-6、IL17、IL

6、-37、VEGF(pVEGF)、Gal-9(pGal-9)的表達水平，并使用SPSS20.0軟件進行相關統(tǒng)計分析。
　　研究結果：
　　1.RA組WBC、Treg、MC細胞的百分比高于HCs組，而淋巴細胞、CD8+T細胞、DNT細胞均低于HCs組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.RA組CD4+、CD8+、Treg、DNT、MC細胞膜上Tim-3的表達水平均高于HCs組，且兩組均值的差異均具有統(tǒng)計學意義(

7、P＜0.05);RA組各亞群胞內Gal-9的表達率與HCs無統(tǒng)計學差別。
　　3.ELISA結果顯示RA組患者血漿中pVEGF、IL-6、TNF-α及pGal-9的濃度均高于HCs組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4.對RA患者進行各指標間的相關分析，發(fā)現(xiàn)不同T亞群上Tim-3的表達率之間存在明顯的正相關關系，說明所有亞群上Tim-3是同向變化的。另外，CD4+、CD8+、Treg上的Tim-3僅與CD8+ G

8、al-9具有正相關性，各亞群Tim-3的水平與炎癥因子、病情活動度的指標不相關。
　　5 RA組的患者中CD4+、CD8+、Treg、DNT和MC細胞亞群上的Gal-9相互之間具有正相關性，說明這些亞群上Gal-9是同向變化的。各細胞群上的Gal-9表達水平與血漿TNF-α、T亞群上VEGF和VEGFR1以及與病情活動度指標如DAS28、CRP、SDAI等存在正相關關系。
　　6.RA組患者的五個亞群細胞中VEGF水平之間、

9、VEGFR1表達率之間以及VEGF和VEGFR1二者之間具有明顯的正相關關系。T亞群上的這兩個指標與血漿TNF-α濃度和疾病活動度指標DAS28、SDA1等存在正相關關系。
　　研究結論：
　　RA患者T亞群的分布與HCs組相比存在差異，RA組Treg細胞高，而雙陰性T細胞低，提示兩類負性調控細胞的表達率和活性調節(jié)機制不同。RA各細胞亞群上的Tim-3、Gal-9均與HCs不同，二者的變化規(guī)律并不一致，Tim-3在各個細胞亞

10、群上顯著升高，但與疾病活動度不相關。RA患者Gal-9在T亞群上的表達與HCs無差異，但與疾病活動度具有正相關關系，與炎癥因子TNF-α也存在相關性。另外Gal-9與VEGF、VEGFR1存在相關性，表明Gal-9與血管生成有密切關系，而VEGF、VEGFR與疾病活動度、炎癥水平也相關的現(xiàn)象則進一步揭示血管生成、炎癥因子、免疫細胞相互作用，共同促進RA患者的免疫失調、炎癥反應，最終導致關節(jié)滑膜增生和骨質破壞。因此，Tim-3反映RA的疾