過敏性紫癜外周血單個核細(xì)胞中Tim-1、Tim-3 mRNA的表達(dá)和外周血中Il-2、IL-4含量測定.pdf

1、目的:過敏性紫癜(Henoch-Schonleinpurpura，HSP)是兒童期常見的白細(xì)胞碎裂性血管炎。臨床上以非血小板減少性紫癜、關(guān)節(jié)腫脹、胃腸道受累和腎炎為主要表現(xiàn)，多見于學(xué)齡期，冬春季為發(fā)病高峰期。HSP發(fā)病機(jī)理尚未研究透徹，多認(rèn)為由多因素所致，感染、食物或者藥物等都可作為致敏因素，近年來研究發(fā)現(xiàn)，HSP患者血清中IgA水平升高，血管壁有IgA免疫復(fù)合物(IgA-IC)沉積。Th細(xì)胞亞群功能失調(diào)在其發(fā)病機(jī)制中也起著非常重要的作

2、用。
　　 Th1細(xì)胞能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，促進(jìn)細(xì)胞免疫;Th2細(xì)胞可增強(qiáng)B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答。Tim(Tcellimmunoglobindomainandmucindomainprotein)家族因其特殊的結(jié)構(gòu)和表達(dá)特異性，可能成為Th1/Th2特異性表面標(biāo)志之一，參與T細(xì)胞的分化及免疫應(yīng)答調(diào)節(jié):Tim-1細(xì)胞主要表達(dá)在分化后的Th2細(xì)胞上，但在Th1細(xì)胞表面幾乎不表達(dá)，可誘導(dǎo)Th2活化增殖、促進(jìn)細(xì)胞因子釋放、激發(fā)Th

3、2型免疫應(yīng)答;Tim-3細(xì)胞則特異性表達(dá)在分化終末期的Th1細(xì)胞上，負(fù)調(diào)節(jié)Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。相應(yīng)地，IL-2作為Th1型細(xì)胞因子、IL-4作為Th2型細(xì)胞因子，二者含量亦隨之發(fā)生變化。
　　 RT-PCR是一種基于傳統(tǒng)PCR檢測方法上的新技術(shù)，同時進(jìn)行靶序列的擴(kuò)增與熒光信號的檢測，有效解決傳統(tǒng)PCR定量只能在終點(diǎn)進(jìn)行檢測和傳統(tǒng)PCR產(chǎn)物的污染問題，具有特異性強(qiáng)，操作簡便，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。
　　 本研究通過RT-P

4、CR檢測過敏性紫癜患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中Tim-1、Tim-3mRNA的表達(dá)水平，并用ELISA方法檢測外周血中IL-2、IL-4含量，探究Tim家族分子在過敏性紫癜發(fā)生中的作用，進(jìn)一步闡明過敏性紫癜的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法:所有的實(shí)驗(yàn)對象均來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院。病例組28例過敏性紫癜患者，男16例，女12例，平均年齡(19.30±9.58)歲，病程2天-3月。其中19例單純型組（僅有皮疹），9例混合型組（有關(guān)節(jié)

5、腫痛、腹痛或蛋白尿中的一項(xiàng)或多項(xiàng)）。對照組為20例健康正常人，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，病例組在性別、年齡上與對照組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。抽取研究對象外周靜脈血，采用SYBRGreen(I)RT-PCR技術(shù)檢測PBMC中Tim-1mRNA和Tim-3mRNA的表達(dá)狀況，并用ELISA方法檢測外周血中IL-2、IL-4含量。
　　 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。正態(tài)分布數(shù)據(jù)IL-2、IL-4含量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，組間比較

6、采用t檢驗(yàn);非正態(tài)分布數(shù)據(jù)Tim-1、Tim-3mRNA表達(dá)量RQ值用中位數(shù)（四分位間距）[MD(IQR)]表示，組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.過敏性紫癜組與健康對照組Tim-1mRNA相對表達(dá)量RQ值分別為0.974(1.108)和0.760(0.514)，過敏性紫癜患者Tim-1mRNA的表達(dá)水平升高，有顯著性差異(P＜0.05)，而在過敏性紫癜患者中單

7、純型組和混合型組之間沒有顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2.過敏性紫癜組與健康對照組Tim-3mRNA相對表達(dá)量RQ值分別為1.359(1.183)和1.604(1.177)，兩者無顯著性差異(P＞0.05)。過敏性紫癜患者中單純型組和混合型組之間亦沒有顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.過敏性紫癜組與健康對照組IL-2含量分別為188.517±12.867和202.759±20.903(pg/ml)，患者組IL

8、-2含量降低，有顯著性差異(P＜0.05)，過敏性紫癜組中單純型組和混合型組IL-2含量分別為193.225±11.758和177.531±7.922（pg/ml），兩者之間有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4.過敏性紫癜組與健康對照組IL-4含量分別為73.046±8.750和62.301±11.232(pg/ml)，患者組IL-4含量升高，有顯著性差異(P＜0.05)，過敏性紫癜中單純型組和混合型組IL-4含量分別為70