利用酵母雙雜交篩選隨機(jī)多肽文庫(kù)的方法研究AP3D1蛋白Ear結(jié)構(gòu)域的結(jié)合特性.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCharacterizingthebindingpropertiesofAP3D1EardomainusingYeastTwo—hybridscreeningofarandompeptidelibraryBvChengqianZhang√一一一Supervisor：ProfJintaoZhangAssociateProfEl

2、iSongBiologicalEngineering一一一BiologicalEngineeringDepartmentMay2013摘要摘要細(xì)胞內(nèi)的膜轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)牽涉到多個(gè)層次的調(diào)控過(guò)程，包括貨物分選、膜泡形成、膜泡運(yùn)輸及融合等。銜接蛋白Adaptin(AP)復(fù)合物是膜轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)中的一種關(guān)鍵調(diào)控因子，可以識(shí)別目標(biāo)蛋白并把其分選到運(yùn)輸膜泡內(nèi)作為貨物進(jìn)行輸送?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)五種銜接蛋白復(fù)合物(APlAP5)，其中AP3(adaptorproteinc

3、omplex3)主要參與從高爾基體／內(nèi)體到溶酶體的轉(zhuǎn)運(yùn)工作。AP3由四個(gè)蛋白亞基組成，其中AP3D1的C末端含有一個(gè)非常保守的Ear結(jié)構(gòu)域，它可以識(shí)別結(jié)合多種輔助蛋白形成運(yùn)輸膜泡，但目前該結(jié)構(gòu)域的分子識(shí)別機(jī)制及由其所介導(dǎo)的生物學(xué)調(diào)控功能還不清楚。蛋白質(zhì)是生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)，而蛋白蛋白之間的相互作用在生命活動(dòng)中發(fā)揮著極其重要的作用，因此對(duì)它的研究可以了解蛋白質(zhì)在生物體中的作用方式，從而揭示它在生物體內(nèi)行使的功能。為了能夠只通過(guò)一次篩選就可

4、以找出Ear結(jié)構(gòu)域的所有配體蛋白，在本論文中，我們利用酵母雙雜交技術(shù)篩選隨機(jī)多肽文庫(kù)的方法，首先找出Ear結(jié)構(gòu)域的結(jié)合多肽，然后通過(guò)生物信息學(xué)分析找出其結(jié)合規(guī)律并在蛋白質(zhì)組水平上預(yù)測(cè)其所有的潛在結(jié)合蛋白，最后再通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證新的配體蛋白。在眾多的研究方法中，酵母雙雜交系統(tǒng)不僅可以研究活細(xì)胞體內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用、靈敏度高，而且不需對(duì)目的蛋白進(jìn)行純化，使實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單易行，因此是研究蛋白質(zhì)相互作用的一種強(qiáng)有力的方法。另外，我們篩選隨機(jī)多肽文庫(kù)，