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文檔簡介
1、目的:鋅指蛋白轉錄抑制因子1和14(Prdm1、Prdm14)是PRDM家族中的兩個成員,在原始生殖細胞(primordialgermcell,PGC)的特化過程中具有重要作用。PRDM1能抑制體細胞分化基因表達;PRDM14不但可以調控PGC的特化而且使其具有誘導多能性。Blimp1(Prdm1)缺失的小鼠只能形成少數(shù)的PGC樣細胞,同時失去了遷移特性、增值和抑制HOX基因的功能;Prdm14缺失突變的小鼠,Sox2表達量下降,PGC
2、細胞沒有發(fā)生基因組表觀遺傳重編程現(xiàn)象。所以,尋找那些與PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白并研究它們之間的作用機制,將對深入了解PRDM1、PRDM14的功能及它們信號傳導途徑具有重要意義。本課題主旨在于使用CytoTrap酵母雙雜交方法從人脾cDNA文庫篩分別選出與PRDM1、PRDM14有相互作用的蛋白,為進一步研究二者的功能、調控機制以及信號傳導途徑提供新的思路和理論依據(jù)。
方法:構建Psos-hPRDM-Flag和
3、Psos-hPRDM14-Flag兩種重組質粒,摸索了制備酵母cdc25H(α)感受態(tài)細胞的最佳條件并獲得了大量cdc25H(α)感受態(tài)細胞,通過梯度實驗確定誘餌基因和文庫質粒共轉的使用量。利用CytoTrap酵母雙雜交篩庫的方法,分別以Psos-hPRDM1-Flag重組質粒、Psos-hPRDM14-Flag重組質粒為誘餌從人脾臟cDNA文庫中篩選出與其能夠發(fā)生相互作用的蛋白。
結果:利用CytoTrap酵母雙雜交系統(tǒng)從人
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