兩株海洋真菌生理活性物質(zhì)的初步研究.pdf

1、近年來海洋真菌已成為研究活性天然產(chǎn)物的重要資源，已從中得到了一定數(shù)量的具有生理活性的化合物，由于其獨(dú)特的生境，為了適應(yīng)海水中鹽度、壓力、低溫等生存條件，有可能會產(chǎn)生一些具有獨(dú)特化學(xué)結(jié)構(gòu)的次級代謝產(chǎn)物，從中有可能發(fā)現(xiàn)與現(xiàn)有藥物不同的新的活性物質(zhì)，成為治療腫瘤、感染、老年癡呆等頑固性疾病的前體藥物。 本論文對兩株海洋真菌CB-2和HLY-2的次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究。菌株CB-2經(jīng)ITS分析及形態(tài)鑒定，確定為Articulospora

2、 sp.。對兩株菌的次級代謝產(chǎn)物展開了初步研究。從菌株CB-2中得到了6個化合物，其中2個化合物CB-4和CB-6經(jīng)結(jié)構(gòu)解析確定為4,6-二羥基-2,3-二甲基.苯甲酸甲酯和3-(4-羥基-苯甲基)-哌嗪-2,5-二酮。從菌株HLY-2中得到了4個化合物，H-2和H-3是兩個同系物，H-2的化學(xué)名稱為7-羥基-4，6-二甲基-3H-異苯呋喃-1-酮，H-3的化學(xué)名稱為7-甲氧基-4，6-二甲基-3H-異苯呋喃-1-酮，都為異苯并呋喃類的

3、化合物，其中H-2的晶體結(jié)構(gòu)為首次報(bào)道。H-4是一個已知的抗生素Nectriapyron，化學(xué)名稱為4-甲氧基-3-甲基-6-(1-甲基-丙烯基)-吡喃-2-酮。H-6為麥角甾醇類的化合物。 對其中的四個產(chǎn)量比較大的化合物進(jìn)行了生理活性的測試，具有抗腫瘤活性的是H-2和H-3，對Raji細(xì)胞的IC50分別為15μg/mL和7.8μg/mL，具有抗氧化活性的是H-2、CB-4和CB-6，對DPPH的清除率的IC50分別是61.21

4、μg/mL、15.81μg/mL和200μg/mL。CB-4和CB-6有微弱的抗金黃色葡萄球菌活性，MIC均為100μg/mL。H-2和CB-6有微弱的抗橙色青霉的活性，MIC均為200μg/mL。 本論文還對來自菌株HLY-2的化合物myeoepoxydiene的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，通過正交設(shè)計(jì)，用瓊脂表面發(fā)酵液體發(fā)酵兩種方式，各進(jìn)行了25次實(shí)驗(yàn)，得到了最優(yōu)的培養(yǎng)基配方。在液體發(fā)酵條件下最佳培養(yǎng)基為：馬鈴薯100g/L，海水2

5、00mL/L，葡萄糖100g/L，乳糖50g/L，磷酸二氫鉀0.5mmol/L，硫酸銨1g/L；瓊脂表面發(fā)酵的是：馬鈴薯250g/L，海水300ml/L，葡萄糖30g/L，乳糖50g/L，磷酸二氫鉀0.65 mmol/L，硫酸銨1g/L。該化合物的產(chǎn)量由原來普通PD培養(yǎng)基液體發(fā)酵的17mg/L，上升到了36.6mg/L和521mg/L，分別提高了2倍和16倍。對兩種發(fā)酵條件下產(chǎn)量、生物量和培養(yǎng)基組分的變化進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)兩種方式下，HL

6、Y-2對碳源、氨態(tài)氮和磷酸鹽的利用上有一些區(qū)別。 用正交設(shè)計(jì)中得到的最佳培養(yǎng)基，瓊脂表面發(fā)酵菌株HLY-210L，通過RP-18反相硅膠柱層析和重結(jié)晶等技術(shù)，得到純化合物mycoepoxydiene約1.5g。在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，化合物mycoepoxydiene對小鼠的LD50為125.98 mg/kg體重，對小鼠肉瘤細(xì)胞s-180的體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)，ED50為11.87mg/kg體重，治療指數(shù)達(dá)到了10.61。與目前臨床上的一些抗

7、癌藥物相當(dāng)。對接種于裸鼠的人胃癌細(xì)胞BGC-823也表現(xiàn)出了良好的抑瘤活性，在14mg/kg的劑量時，抑制率達(dá)到了42.62％，并且沒有引起動物體重下降。說明MycoE對人類腫瘤也是有效的，對該藥今后的研究開發(fā)有重要意義。 對化合物mycoepoxydiene的抑瘤機(jī)理進(jìn)行了初步研究。通過形態(tài)觀察、流式細(xì)胞術(shù)、彗星電泳和DNA梯度電泳幾種方式，發(fā)現(xiàn)該化合物對Raji細(xì)胞抑制并不是誘導(dǎo)凋亡，有可能是使細(xì)胞壞死或類似于壞死的一些方式