海洋真菌灰綠青霉IIUC-5菌株抗腫瘤活性物質(zhì)的初步研究.pdf

1、近年來，海洋天然產(chǎn)物的研究一直是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。篩選活性物質(zhì)為海洋藥物提供先導(dǎo)化合物是目前海洋天然產(chǎn)物研究的重要組成部分。本文進(jìn)行了海洋抗腫瘤活性菌株的篩選，海洋真菌HUC-5抗腫瘤活性化合物的初步分離及其抗腫瘤機(jī)理的研究。
　　 對本實(shí)驗(yàn)室的26 株海洋真菌，采用MTT 法進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選，有9株菌具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性（≥50％），占總供測菌株的34.6％，其中有6 株對宮頸癌Hela細(xì)胞有抑制活性，對小鼠腎上腺

2、嗜鉻瘤細(xì)胞PC-12細(xì)胞有抑制作用的共5株。另外，有2 株對Hela、PC-12細(xì)胞株均有抑制活性，對HUC-5菌株進(jìn)行了菌種鑒定、發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物進(jìn)行了部分理化性質(zhì)檢測，并對乙酸乙酯提取物及其初步純化產(chǎn)物的抗腫瘤活性進(jìn)行了初步研究。
　　 對菌株HUC-5進(jìn)行了形態(tài)學(xué)鑒定，根據(jù)其菌落形態(tài)、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等形態(tài)特征，初步鑒定該菌為灰綠青霉（Penicillium glaucum）。
　　 對菌株HUC-5乙酸乙酯提取物部

3、分理化性質(zhì)的研究結(jié)果顯示，與常溫對照組相比，該菌的乙酸乙酯提取物在40-50℃左右保持較好的活性，溫度80℃時活性下降66％，90℃時僅保持22.6％的活性，在100℃及以上溫度時活性完全喪失。對該菌發(fā)酵液中抗腫瘤活性物質(zhì)的溶解性質(zhì)測定表明，活性成分溶于乙酸乙酯、甲醇等有機(jī)溶劑，其中在乙酸乙酯中溶解性最好。
　　 對菌株HUC-5乙酸乙酯提取物的抗腫瘤作用研究表明，HUC-5乙酸乙酯提取物具有廣譜的抗腫瘤細(xì)胞活性，對Hela、小

4、鼠黑色素瘤細(xì)胞B-16、人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞BT474、人喉癌Hep-2、PC-12 均有抑制活性，其中對Hep-2 腫瘤細(xì)胞抑制性最強(qiáng)，在0.4 mg/mL 濃度下，達(dá)到96.7％，且抑制作用具有時間和劑量依賴性，IC50 為0.12 mg/mL。鏡檢發(fā)現(xiàn)處理的Hep-2細(xì)胞在形態(tài)表現(xiàn)為染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞收縮，及類似凋亡小體。通過彗星電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，0.4 mg/mL 乙酸乙酯提取物對Hep-2細(xì)胞DNA有重度損傷；瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示

5、出典型的DNAladder；流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明，在分別處理16 h，32 h 時，Hep-2 都有明顯的細(xì)胞凋亡，凋亡率分別為45.85％和86％。菌株HUC-5乙酸乙酯提取物主要通過誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
　　 通過Sephadex LH-20 柱色譜初步分離抗腫瘤活性成分，并檢測其抗腫瘤活性，結(jié)果顯示有5組成分抗腫瘤活性相對較高，活性分別為15.65％、10.69％、14.48％、16.99％、