兩株南極海洋來(lái)源真菌活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、南極海洋來(lái)源微生物生存環(huán)境特殊,其次級(jí)代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎、活性獨(dú)特,是新型藥物先導(dǎo)化合物的潛在來(lái)源。本論文采用了活性篩選和化學(xué)篩選相結(jié)合的方法,對(duì)南極來(lái)源具有抗腫瘤活性的微生物進(jìn)行分離和篩選,選取其中2株具有抗腫瘤活性的真菌進(jìn)行了活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究。
　　 從采自南極海域的海綿、海藻、海水、海泥等11個(gè)樣品中分離得到了58株真菌。通過海蝦生物致死法初篩,獲得活性菌株8株。對(duì)這8株菌株,我們采用兩種培養(yǎng)基發(fā)酵,并采用人慢性髓原白

2、血病K562細(xì)胞通過SRB法篩選,得到5株具有較強(qiáng)細(xì)胞毒活性的菌株。對(duì)5株活性真菌進(jìn)行發(fā)酵條件摸索,以其中2株(PRB-2、PR4-1-3)作為主要研究對(duì)象進(jìn)行大量發(fā)酵,系統(tǒng)研究其活性次級(jí)代謝產(chǎn)物。
　　 對(duì)2株發(fā)酵產(chǎn)物的乙酸乙酯提取物采用薄層色譜、正相及反相硅膠柱色譜、LH-20凝膠柱色譜、高壓液相色譜等現(xiàn)代分離純化手段,從菌株P(guān)RB-2(Penicillium crustosum)的粗提物中分離得到15個(gè)單體化合物(1-15

3、);從菌株P(guān)R4-1-3(Penicillin chrysogenum)的粗提物中分離得到9個(gè)單體化合物(16-24);共24個(gè)化合物。
　　 利用現(xiàn)代波譜學(xué)(IR,UV,MS,NMR,X-ray)確定了全部24個(gè)化合物(1-24)的化學(xué)結(jié)構(gòu)(化合物結(jié)構(gòu)及名稱參見Table1),其中新化合物3個(gè)。新化合物結(jié)構(gòu)類型為γ-丁內(nèi)酯(1-3),其中1為新骨架化合物。已知化合物包括5個(gè)生物堿(4-7、18)、4個(gè)蒽醌(8、19-21),6

4、個(gè)苯的衍生物(9-11、22-24)、2個(gè)杉酮類化合物(16-17)和4個(gè)其他類化合物。
　　 通過SRB法初步評(píng)價(jià)了新化合物1-3的細(xì)胞毒活性,化合物1-3沒有表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒活性。同時(shí)以MDCK細(xì)胞株為模型,采用CPE方法,對(duì)新化合物1-3和已知化合物16.17的抗H1N1流感病毒活性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià),化合物2在50 ug/mL時(shí),抑制率達(dá)到42.9％,具有弱效抗病毒活性;化合物16在50 ug/mL時(shí),抑制率達(dá)到50％,具

5、有中效抗病毒活性。通過文獻(xiàn)查閱得知,化合物viridicatin(4),viridicatol(5),cyclopenine(6),cyclopenol(7);secalonic acid D(16),meleagrin(18),citreorosein(19)和emodin(21)都具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性,分別為兩株菌發(fā)酵浸膏的主要活性成分,與浸膏活性篩選結(jié)果相符。
　　 綜上,本文從采自南極海洋的共11個(gè)樣品中分離篩選出5株具