全反式維甲酸誘導(dǎo)HepG2細胞分化和降低軟瓊脂克隆形成能力及其機制的初步探討.pdf

1、目的：研究全反式維甲酸(ATRA)體外對人肝癌細胞株(HepG2)分化、凋亡及軟瓊脂克隆形成能力的影響；并初步探討ATRA調(diào)控骨橋蛋白(OPN)表達、誘導(dǎo)HeDG2細胞分化的分子機制。 方法：ATRA處理HepG2細胞，光鏡下觀察細胞形態(tài)；酶動力學(xué)法檢測γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)比活性、甲胎蛋白(AFP)分泌量的變化；MTT法分析ATRA對HepG2增殖的影響；軟瓊脂培養(yǎng)法觀察HepG2的克隆形成能力；Hoechst染色法檢

2、測ATRA作用前后的細胞凋亡情況；Western blot檢測HepG2細胞中ERK<,2>的磷酸化水平及OPN、NF-κB蛋白表達量。 結(jié)果：ATRA顯著抑制HepG2細胞在體外的增殖并誘導(dǎo)細胞分化和凋亡，使代表肝細胞惡變的γ-GT比活性、AFP分泌量明顯下降(P<0.05)；軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果表明未經(jīng)ATRA處理的HepG2可在軟瓊脂上長成克隆，但經(jīng)ATRA刺激后，其形成克隆變小且數(shù)目明顯減少；westem blot結(jié)

3、果顯示，未經(jīng)ATRA處理的HepG2細胞ERK<,2>的磷酸化水平及OPN的表達量均很高，經(jīng)ATRA處理5d后，ERK<,2>的磷酸化及OPN的表達明顯減少，并具顯著的時間劑量依賴性，10μmol/L ATRA作用70d后ERK<,2>的磷酸化及OPN的表達幾乎為零，但ERK<,2>、NF-κB蛋白表達無變化。 結(jié)論：ATRA是HepG2有效的分化誘導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)細胞分化、凋亡并可降低HepG2的克隆形成能力；ATRA誘導(dǎo)Hep