全反式維甲酸誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞分化為樹(shù)突狀細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：樹(shù)突狀細(xì)胞(derldritic cell，DC)是目前已知唯一能激活未致敏T細(xì)胞(naive T cell s)的抗原呈遞細(xì)胞 (antigen preserlting cells，APC)。白血病源性DC(L-DC)既帶有白血病抗原，同時(shí)又是抗原提呈細(xì)胞，來(lái)源于患者本人，不存在MHC限制，能有效地激活特異的腫瘤免疫，有可能在白血病的免疫治療中發(fā)揮重要作用。但L-DC與證常人CD14<'+>或CD34<'+>前體細(xì)胞來(lái)源的CD8

2、3<'+>的DC相比具有相對(duì)不成熟性。而DC的免疫刺激特征有賴(lài)于成熟狀態(tài)。因此，如何獲得臨床上需要的有功能的 L-DC，在白血病細(xì)胞免疫研究和臨床治療中有重要的理論和實(shí)踐意義。應(yīng)用全反式維甲酸(ATRA)治療急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)取得巨大成功，使APL成為治療效果較好的白血病之一，但仍無(wú)法解決微小殘留病(MRD)及復(fù)發(fā)問(wèn)題。ATRA能否誘導(dǎo)APL細(xì)胞為成熟DC，作為腫瘤疫苗治療APL及解決MRD和復(fù)發(fā)問(wèn)題是本實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃凇?

3、 方法：采集有特征性染色體異常：t(15；17)(q22；q21) APL初治患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞以及應(yīng)用急性早幼粒細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞株分別在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并以ATRA處理。實(shí)驗(yàn)組利用ATRA+GM-CSF+IL-4因子組合分別對(duì)APL細(xì)胞和HL-60細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；對(duì)照組則用無(wú)水乙醇+GM-CSF+IL-4組合及GM-CSF+IL-4組合；所有組別于培養(yǎng)第8天加入TNF-α。加入TNF-α24或72小時(shí)后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)D

4、C免疫表型、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行上清夜IL-12水平測(cè)定，并以MTT法觀察L-DCs刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力(MLR)及針對(duì)白血病細(xì)胞的細(xì)胞毒作用(CTL效應(yīng))。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組均成功獲得具有樹(shù)突狀突起的細(xì)胞，但以實(shí)驗(yàn)組樹(shù)突狀突起明顯。染色體檢查證實(shí)APL-DCs仍具有急性早幼粒細(xì)胞白血病來(lái)源的遺傳學(xué)特征。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組APL-DC，其CDla、CDld、CD83、CD80、CD86和HLA-DR等

5、表型均較對(duì)照組明顯增高(p<0.05)；而HL-60-DC，除CDla外，上述細(xì)胞表型亦均較對(duì)照組明顯增高(p<0.05)。上清液中IL-12分泌水平實(shí)驗(yàn)組均較對(duì)照組明顯增高(p<0.05)。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組APL-DCs具有明顯的刺激自體淋巴細(xì)胞增殖的能力，且刺激能力隨APL-DCs與淋巴細(xì)胞比例的增加而升高。HL-60-DCs無(wú)明顯刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力。對(duì)靶細(xì)胞的細(xì)胞毒作用(CTL效應(yīng))實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組APL-DC介導(dǎo)

6、的細(xì)胞殺傷率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論：利用ATRA組合可以成功地誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞為樹(shù)突狀細(xì)胞，細(xì)胞表型檢測(cè)證實(shí)為成熟DC，其介導(dǎo)的MLR及CTL效應(yīng)明顯強(qiáng)于非ATRA組合所誘導(dǎo)的DC。提示DC途徑有可能是ATRA治療 APL 有效的新機(jī)制，以ATRA-APL-DCs為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗有可能在解決APL的MRD等問(wèn)題上發(fā)揮強(qiáng)大的治療作用，為APL的治療研究提供了一個(gè)新的思路和策略。HL-60細(xì)胞源性DC介導(dǎo)