全反式維甲酸對哮喘大鼠血管重塑的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過建立哮喘大鼠模型，以VEGF、MMP-9為指標(biāo)，以此來觀察全反式維甲酸干預(yù)治療后支氣管粘膜VEGF、MMP-9的表達(dá)以及血清中VEGF、MMP-9的變化，從而探討全反式維甲酸對哮喘大鼠血管重塑及氣道重塑的預(yù)防作用及可能機(jī)制，為臨床上支氣管哮喘的防治提供新的途徑。
　　方法:清潔SD雄性大鼠30只，6周齡，體重100-120g之間，隨機(jī)分為正常對照組、哮喘模型組、全反式維甲酸干預(yù)組，每組10只。
　　1.正常對

2、照組:所有的幼鼠于實(shí)驗(yàn)第1、8天時腹腔注射生理鹽水2ml進(jìn)行致敏，于第15天開始將幼鼠放于玻璃箱中（半密閉式的），予生理鹽水5ml霧化吸入30min，隔日1次，總共激發(fā)20次，每次30min。
　　2.哮喘組:所有的幼鼠于實(shí)驗(yàn)第1、8天腹腔注射OVA100mg、氫氧化鋁100mg（混合于9g/L生理鹽水2ml內(nèi)）開始致敏，于第15天開始將幼鼠放于玻璃箱內(nèi)（半密閉式），予2％OVA生理鹽水5ml霧化吸入30min，隔日1次，總共激發(fā)

3、20次，每次30min，待大鼠表現(xiàn)出嗆咳、煩躁、呼吸困難、反應(yīng)遲鈍等哮喘發(fā)作的典型癥狀即為激發(fā)成功。
　　3.全反式維甲酸干預(yù)組:所有幼鼠的致敏及激發(fā)的方法同哮喘模型組，但每次激發(fā)前30min按20mg/Kg經(jīng)口腔灌服全反式維甲酸的方式給幼鼠用藥，余同哮喘模型組。
　　最后一次激發(fā)24小時后，用1％戊巴比妥鈉麻醉，收集肺泡灌洗液、血清及肺組織。計數(shù)肺泡灌洗液中的細(xì)胞數(shù)并進(jìn)行分類;ELISA法檢測血清中的VEGF含量，免疫組化

4、法檢測大鼠肺組織中VEGF、MMP-9的表達(dá);肺組織行病理切片，HE染色，采用計算機(jī)圖像分析技術(shù)測定氣道壁厚度及血管密度指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　1.肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)(×106)的結(jié)果:正常對照組9.68±2.71、1.17±0.48，哮喘組33.91±3.67、5.38±0.63，全反式維甲酸干預(yù)組12.88±2.72、2.19±0.53。哮喘組與全反式維甲酸干預(yù)組細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)

5、均高于正常對照組(F=64.860P＜0.05，F(xiàn)=90.599 P＜0.01)，但全反式維甲酸干預(yù)組上述細(xì)胞計數(shù)均明顯低于哮喘組，有統(tǒng)計學(xué)意義(F=87.770，P＜0.05)。
　　2.病理結(jié)果:正常對照組的大鼠肺組織病理切片見偶有炎性細(xì)胞浸潤，支氣管管腔薄厚均勻，血管分布整齊規(guī)則，肺組織結(jié)構(gòu)完整。哮喘組大鼠的肺組織病理切片可見大量炎性細(xì)胞浸潤，氣道管壁增厚、血管壁增厚，新血管生成。全反式維甲酸干預(yù)組的炎性細(xì)胞的浸潤程度，氣道

6、管壁、血管壁的增厚程度，血管增生程度均較哮喘組減輕。
　　3.圖像分析支氣管管壁厚度及血管密度:正常對照組支氣管氣道厚度（μm2/μm）與血管密度（個/mm2）70.87±1.80、20.11±6.08，哮喘組98.78±2.86、56.94±8.28，全反式維甲酸干預(yù)組86.20±2.36、40.64±4.50。哮喘組與全反式維甲酸干預(yù)組支氣管壁厚度及血管密度均高于正常對照組(F=58.749 P＜0.05，F(xiàn)=89.780 P

7、＜0.05)，而哮喘組上述兩指標(biāo)又均高于全反式維甲酸干預(yù)組，有統(tǒng)計學(xué)意義(F=86.920，P＜0.05)。
　　4.血清ELISA法檢測血清中VEGF的含量(pg/ml)水平:與正常對照組(137.70±17.02)相比，哮喘組(203.86±17.00)、全反式維甲酸干預(yù)組(168.89±16.66)明顯增加(F=61.350，P＜0.05);其中哮喘組又高于全反式維甲酸干預(yù)組(P＜0.05)。
　　5.免疫組化法檢測結(jié)

8、果:與正常對照組（0.22±0.04、0.22±0.01）相比，哮喘組（0.46±0.05、0.63±0.02）、全反式維甲酸干預(yù)組(0.28±0.06、0.41±0.02)大鼠肺組織中VEGF、MMP-9平均光密度值明顯增加，其中哮喘組、全反式維甲酸干預(yù)組均高于對照組(F=73.38，P＜0.05; F=56.921，P＜0.05)。
　　6.相關(guān)性分析結(jié)果:肺組織中VEGF、MMP-9的表達(dá)水平(r=0.972，P＜0.01)

9、與血清中VEGF水平呈顯著正相關(guān)(r=0.856，P＜0.01)，與血管密度及氣道壁厚度呈顯著正相關(guān)(r=0.890，P＜0.01);血管密度與氣道壁厚度呈顯著正相關(guān)(r=0.789，P(')＜0.01);且肺組織中VEGF的表達(dá)水平與MMP-9表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（r=0.803，P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.哮喘組大鼠細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞均高于正常組，說明哮喘是一種炎癥反應(yīng)。而應(yīng)用全反式維甲酸干預(yù)后，干預(yù)組大鼠

10、細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)均較哮喘組降低，說明全反式維甲酸有抑制氣道炎癥反應(yīng)的作用。
　　2.哮喘組大鼠的肺組織病理可見氣道管壁及血管壁增厚，新血管增生。氣道壁厚度、血管壁厚度及血管密度均度明顯高于正常對照組，說明哮喘存在氣道重塑、血管重塑。應(yīng)用全反式維甲酸干預(yù)后，干預(yù)組大鼠的氣道管壁、血管壁增厚程度及血管增生程度均低于哮喘組，說明全反式維甲酸可以減輕氣道重塑、血管重塑。血管密度與氣道厚度呈正相關(guān)，說明血管重塑在氣道重塑中起著重要

11、作用。
　　3.哮喘組大鼠肺組織中VEGF、MMP-9的表達(dá)水平顯著升高，且肺組織MMP-9的表達(dá)與血清VEGF濃度呈正相關(guān)，全反式維甲酸干預(yù)后上述指標(biāo)均較哮喘組降低，說明全反式維甲酸可抑制MMP-9、VEGF的表達(dá)，降低血清中VEGF水平，從而影響血管重塑、氣道重塑。
　　4.相關(guān)性分析結(jié)果表明肺組織中VEGF、MMP-9的表達(dá)水平與血管密度及氣道壁厚度呈顯著正相關(guān)，從而得出結(jié)論VEGF、MMP-9都參與了血管重塑及氣道重