人體指甲中尿酸定量方法的建立及硫代脯氨酸結(jié)構(gòu)同位素標記新型質(zhì)譜衍生化試劑的開發(fā).pdf

1、尿酸是生物體內(nèi)一種內(nèi)源性抗氧化劑，主要由食物中的嘌呤分解和細胞代謝分解的核酸而來。近年來，高尿酸血癥和痛風的患病率持續(xù)增加。而痛風因在早期階段沒有明顯癥狀，所以并不能早期發(fā)現(xiàn)。而且人體血尿酸水平的增高會導致心血管及其他代謝性疾病。因此迫切需要開發(fā)一種簡便，廉價，高靈敏的早期診斷方法。非侵襲性指甲樣本相對于血液，尿液等生物樣本，具有采集方便，無感染危險，易于儲存等優(yōu)點，目前尚未有將其應用于痛風診斷的文獻報道。
　　本研究中使用高效液

2、相(HPLC)-紫外檢測器(UV)首次建立了對人體指甲中尿酸的定量分析方法。利用日立HPLC系統(tǒng)，GL Sciences公司的ODS-3色譜柱(250mm×4.6mm I.D.，4.0μm)，流動相為磷酸鹽緩沖液(74mmol/L，pH2.2)∶甲醇=98∶2，流速1.0mL/min，在284nm處進行紫外檢測，分析時間為10分鐘。在1.0-10000ng范圍內(nèi)線性關系良好(r2≥0.9999);最低檢測限(S/N=3)為2.0pg;日

3、內(nèi)、日間精密度范圍為1.68％～8.02％;平均加樣回收率為103.40％。對10名健康志愿者（5男5女）10個手指中尿酸含量進行了比較。結(jié)果表明男性10個手指中尿酸含量普遍高于女性，男性和女性大拇指及小拇指中尿酸含量變動較大，然而食指、中指及無名指三個手指中尿酸含量相對穩(wěn)定，所以在以后的研究中采用上述三個手指的指甲為尿酸定量分析的樣本。在此，我們?yōu)榱诉M一步驗證指甲在痛風診斷中的有效性，對26名健康志愿者(22-60歲)及22名痛風患者

4、(26-65歲)的手指甲中尿酸含量進行了比較，得出健康志愿者手指甲中尿酸定量范圍為44.57±9.37ng/mg，而痛風患者尿酸定量范圍為144.7±47.93ng/mg。痛風患者組指甲中尿酸含量明顯高于健康志愿者組。具有顯著性差異(p＜0.01)，因此人體指甲中尿酸定量分析檢測為痛風診斷提供了一種新的非侵襲方法。
　　手性是內(nèi)源性代謝物的一個重要特征，然而現(xiàn)代代謝組學研究的主流LC-MS聯(lián)用技術，也無法鑒別手性代謝物。但柱前衍生

5、化方法可以解決手性代謝物分離問題，所以我們以帶手性中心的硫代脯氨酸為母體與帶同位素標記苯甲酰氯進行反應，合成了具有靶向氨基官能團手性代謝物同位素標記質(zhì)譜手性試劑。并應用于手性代謝物1-苯乙胺(R，S-PEA)、1-(1-萘基)乙胺(R，S-NEA)的分析，R，S-PEA分離度(Rs)為1.90，R，S-NEA分離度(Rs)為2.21，達到完全分離，分離效能良好。在質(zhì)譜檢測中，最佳轟擊能量為40eV時，獲得高強度的特征碎片離子m/z為77